Lowry protein assay(단백질 정량 분석) 예비레포트

소개

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목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 실험 기기 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
정량 분석과 정성 분석의 차이점을 알고 정량 분석의 한 종류인 단백질 정량 분석의 정의에 대해 이해한다. 단백질 정량 분석 방법인 UV method, Lowry method, Bradford method, BCA method에 대해 이해한 후, Lowry method를 이용하여 다양한 농도의 단백질 시료를 정량 분석해본다. UV/Vis spectrophotometer의 원리와 사용 방법에 대해 이해하고 이를 이용해 시료의 흡광도를 측정하여 시료 각각의 농도를 구해본다.

2. 바탕 이론
① 단백질 정량 분석
정량 분석은 시료에 존재하는 특정 화학종이나 여러 화학종들의 절대적인 양, 상대적인 양을 결정하는 분석법을 말한다. 일반적으로 정량 분석을 하기 전에 정성 분석을 먼저 하는데, 정성 분석은 정량 분석과 달리 시료에 어떤 화학종이 있는지 시료의 구성 성분을 분석하는 방법이다.
단백질 정량 분석의 경우, 시료 내 단백질의 양, 농도를 측정하기 위해 사용된다. 단백질 정량 분석에는 Lowry method, UV method, BCA method, Bradford method 등이 있다.

② UV method
UV method는 UV/Vis spectroscopy라고도 불리며, 물질이 빛을 얼마나 흡수하는지 흡광도를 이용하여 측정하는 method이다. UV method는 방향족 아미노산(aromatic amino acid)의 특징을 이용하였는데, 방향족 아미노산은 250nm 이상의 파장에서 자외선을 흡수하며 최대 280nm에서 최대 흡광도를 가지게 된다. 방향족 아미노산은 방향족 고리를 가진 아미노산으로 페닐알라닌, 트립토판, 티로신 등이 있다. 페닐알라닌은 258~260nm에서, 티로신은 275nm, 트립토판은 280nm에서 자외선을 최대로 흡수하게 된다.
UV method를 이용하여 단백질 시료의 농도를 구할 때 Lambert-Beer’s Law가 적용된다. 이 법칙은 흡광도가 시료 용액의 두께에 비례한다는 Lambert 법칙에 흡광도가 시료 용액의 농도에 비례한다는 Beer의 법칙을 합한 법칙이다.

참고자료

· Biter Amadeo B, Jeroen Pollet, Wen-Hsiang Chen, Ulrich Strych, Peter J. Hotez, Bottazzi Maria Elena, “A method to probe protein structure from UV absorbance spectra”
· Jakob H. Waterborg, “The Lowry Method for Protein Quantitation”
· Mary Johnson, Synatom Research, Princeton, New Jersey, United States
· “Protein Quantitation”
· Thermo Fisher scientific, “BCA Assay and Lowry Assays”
· Nicholas J. Kruger, “The Bradford Method For Protein Quantitation”
· Thermo Fisher scientific, “Bradford Assay”
· NCSS Statistical Software, “Error-Bar Charts”
· MSDS