Cell Transfection and Cell lysis 레포트

소개

정제한 plasmid DNA를 HEK-293T cell에 chemical방법으로 transfection시킨 후, Western blot을 진행하기 위해 HEK-293T cell을 lysis하여 protein sample을 얻는 실험에 대한 레포트입니다.
레포트에 시간을 많이 들여 A+ 받았던 과목이기 때문에, 도움이 되실 거라 생각합니다.

목차

1. Background
* Cell Transfection
1-1 Cell transfection
1-2 HEK-293T cell
1-3 Epitope tagging
1-4 Transfection reagent
* Cell Lysis
1-a Cell lysis
1-b Lysis buffer

2. Purpose and Method ------------------------
* Cell Transfection
2-1 Purpose
2-2 Method
* Cell Lysis
2-a Purpose
2-b Method

3. Result -------------------------------------
3-1 Cell picture and Cell lysis centrifuge picture
3-2 Conclusion and Discussion

4. Reference ----------------------------------

본문내용

1. Background

* Cell Transfection
1-1 Cell transfection
1) 정의
- 관심있는 외부 gene을 삽입하여 외부의 DNA가 cell 내에서 발현되도록 하는 것
- Virus 감염 이외의 방법을 사용하여 핵산(DNA 또는 RNA)을 cell에 인공적으로 도입하 는 과정

2) 특징

- Cell의 특성을 변화시켜 cell 수준에서의 유전자나 단백질의 발현과 기능을 연구할 수 있다.
- Eukaryotic cell의 유전자 산물 및 기능을 연구할 수 있는 analytical tool이다.
- 유전자의 발현과 단백질 생산의 조절 분석에 사용할 수 있기 때문에, Genomics와 Proteomics 사이의 연결고리가 될 수 있다.
- 유전물질을 cell에 성공적으로 도입하는 것은 DNA의 quantity 및 quality, incubating 시간, transfection reagent의 비율, transfected cell의 origin, 그리고 cell culture 내 serum의 유무 등에 따라 달라진다.

3) Transfection 방법
- Chemical Methods
① Calcium-Phosphate
원리 : (+)charge를 띠는 calcium phosphate가 (-)charge를 띠는 DNA와 만나 복합체를 형성하고, 복합체가 cell의 표면에 흡수되고 endocytosis를 통해 cell 내로 진입한다.
특징 : 독성은 없지만, 20~50%의 Transfection 효율로, Primary cell에서는 transfection 이 잘 되지 않는다.

② DEAE-Dextran
원리: (+)charge를 띠는 cationic polymer를 (-)charge를 띠는 DNA와 만나 복합체를 형 성한 후, (+)charge를 띠는 DNA가 (-)charge를 띠는 cell membrane에 융합되 고 endocytosis를 통해 cell 내로 진입한다.

참고자료

· What is Transfection?
· https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/references/gibco-cell-culture basics/transfection-basics/introduction-to-transfection.html
· Cell transfection, 다인바이오
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=35
· Eelctroporation, 생명과학대사전
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=421558&cid=60261&categoryId=60261
· Microinjetion, 분자세포세물학백과
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5929955&cid=61233&categoryId=61233
· HEK-293T
· https://www.atcc.org/products/crl-3216
· Epitope tagging, 분자세포생물학백과
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5751526&cid=61233&categoryId=61233
· Cell lysis, 생명과학대사전
· https://terms.naver.com/entry.naver?docId=1612025&cid=50317&categoryId=50317