A+ 생화학실험 <6주차. Plasmid DNA Miniprep> 레포트

소개

안녕하십니까.

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생화학실험 PRE+MAIN 레포트 통합본입니다.
생화학실험 1등으로 A+ 받았습니다.

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목차

1. Title
2. Purpose
3. Theory
4. Chemicals & Apparatus
5. Procedure
6. Data & Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Title
6주차. Plasmid DNA Miniprep

2. Purpose
Alkaline Lysis Method를 통하여 E. coli에서 Plasmid DNA를 추출한다.

3. Theory
3.1 Plasmid DNA

박테리아 내에는 bacterial DNA와 함께 plasmid DNA가 존재한다. Plasmid DNA는 extrachromosomal DNA로, genomic DNA에 해당하는 bacterial DNA와는 달리 자체적 복제가 가능한 복제 기점을 가진다. 또, 생존에 필수적이지 않은 정보를 담고 있으며, 항생제 내성 유전자 같은 선택적 마커가 포함되기도 한다. 이를 통해 항생제가 포함된 배지에서 cell-selection을 진행할 수 있으며, 이로부터 유전자 발현 여부를 조사할 수 있다. 따라서 plasmid DNA를 성공적으로 transformation한 세포만을 선택적으로 배양, 회수함으로써 plasmid DNA를 획득할 수 있다. 더불어, plasmid DNA는 super coiled 형태의 DNA로, 유전자 조작, 분리, cloning 등 유전공학 분야에 용이하게 활용된다. 또 다른 장점으로는, plasmid DNA는 pH 변화에 따른 DNA의 구조 변화가 genomic DNA보다 적고, 복원이 쉬워 분리 및 조작이 용이하다.

3.2 Plasmid DNA extraction
Plasmid DNA extraction은 세포 내에 존재하는 작고 원형의 DNA 분자인 plasmid DNA를 분리하고 정제하기 위한 일련의 실험 과정을 뜻한다. 일반적으로 세포 벽을 분해하고 세포 내용물을 분리한 다음, 화학적 혹은 물리적 방법을 통하여 plasmid DNA를 순수하게 추출하는 단계를 포함한다. Plasmid DNA extraction은 추출할 plasmid DNA의 양에 따라 mini, midi, maxi prep으로 구분한다.

참고자료

· Jeremy MB, Biochemistry 8th, Freeman, 2015, pp. 153~157, pp. 615~618
· JoAnne E, Roger B, Mustak AK, Minipreps of plasmid DNA, Current Protocols in Molecular Biology, 1991, 1(6), pp. 15~26.