MTT assay A+ report

소개

"MTT assay A+ report"에 대한 내용입니다.

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Result
4. Discussion
5. References

본문내용

-Objective
 Hematocytometer를 이용하여 세포 수를 측정하고 계산한다.
 MTT assay 실험 원리를 바탕으로 세포 생존 및 증식을 측정하는 방법을 이해한다.

-Principle 및 Theory
 Cell counting 시 사용되는 Trypan blue의 입자는 세포막을 확산의 방법으로 통과하여 세포 내부로 유입된다. 살아있는 세포는 ATP 에너지를 이용한 exocytosis로 trypan blue 입자를 다시 세포 외부로 방출하지만, 에너지를 생산할 수 없는 죽은 세포는 exocytosis를 할 수 없어 청색으로 염색된다.
 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 살아있는 세포의 미토콘드리아 내막을 통과하여 대사적으로 활성을 갖는 세포에 의해 Formazan 결정으로 환원되고, 이는 자주색을 띄는 비수용성의 분자이다. 따라서 DMSO(Dimethyl sulfoxide)와 같은 유기용매에 의해 용해된 Formazan의 흡광도를 통해 세포의 증식과 생존율 및 미토콘드리아의 대사활성을 측정한다.
가. MTT assay의 원리와 장단점, 응용 가능한 분야에 대하여 조사하시오.
MTT assay는 세포대사 활성을 색 변화로 측정하는 실험으로 세포 독성 실험이라고도 한다. Tetrazolium salt인 MTT를 살아 있는 세포에 처리하면, 미토콘드리아 안의 oxidoreductase enzyme(NADPH)에 의해 환원되어 보라색을 띠는 formazan 결정체를 형성한다. 죽은 세포의 경우, 미토콘드리아가 터져 없으므로 formazan이 형성되지 않고, 색을 띠지 않는다. 이렇게 생성된 formazan은 비수용성으로, 유기용매 또는 계면활성제 등에 녹여 570nm에서 흡광도(세포의 탈수소효소 환원능력)를 측정한다. 이 때, 흡광도는 살아 있는 세포에 비례하여 증가하게 된다.

MTT assay의 장점은 세포가 부착된 상태에서 생존도를 비교적 빠르고 쉽게 측정할 수 있으며, 소량의 세포로도 측정 가능하다는 점이다. 하지만 MTT assay가 미토콘드리아 기능을 기반으로 하기 때문에 손상되거나 기능이 이상한 미토콘드리아를 가진 세포의 생존도를 정확하게 반영하지 못할 수 있다는 단점이 있다. 또한, 이 방법은 세포밀도, incubation시간, pH 등의 요인에 영향을 받을 수 있기에 결과의 정확성에 영향을 미칠 수 있다.

참고자료

· Kim et al., Application of a non-hazardous vital dye for cell counting with automated cell counters, Anal Biochem, 2015
· https://ko.wikipedia.org/wiki/MTT_%EC%96%B4%EC%84%B8%EC%9D%B4
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/cell-counting-and-health-analysis/cell-proliferation-kit-i-mtt
· https://blog.naver.com/lckoreamkt/223395740826
· https://www.aatbio.com/resources/faq-frequently-asked-questions/What-are-the-differences-between-MTT-and-WST-assays
· https://www.sigmaaldrich.com/KR/ko/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/imaging-analysis-and-live-cell-imaging/cell-viability-and-proliferation?utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=13065547411&utm_content=130760049348
· https://en.wikipedia.org/wiki/HCT116_cells