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리포트 / 자연과학

미생물 면역학 실험보고서

"미생물 면역학 실험보고서"에 대한 내용입니다.
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최초등록일 2024.01.03 최종저작일 2023.10
생물학 실험 미생물 면역학
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미생물 면역학 실험보고서
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    • 🔬 미생물 면역학의 심층적인 실험 과정 상세 기록
    • 🧬 Deinococcus radiodurans의 유전체 분석 방법론 제공
    • 📊 실험 결과와 고찰을 체계적으로 정리한 보고서

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    소개

    "미생물 면역학 실험보고서"에 대한 내용입니다.

    목차

    1. Preparation of media (LA/LB & TGY broth-agar)
    2. Bacteria cell culture
    3. Genome prep (Genomic DNA extraction)
    4. PCR for 16S rRNA sequencing
    5. Agarose gel Electrophoresis
    6. DNA sequencing analysis
    7. Measurement of CFU
    8. Isolation of non-pigment colonies
    9. PCR for carotenoid genes
    10. Plasmid mini prep
    11. Transformation
    12. Data analysis

    본문내용

    -실험과정
    -Cell harvesting for Gram-Positive bacteria
    1. 70°C incubator를 미리 켜서 온도를 올려 놓는다.
    2. Lysozyme buffer (sample 당 0.004g lysozyme + 200μl (마이크로리터; λ = 람다) GPT buffer) 를 준비한다.
    3. 유전체를 뽑고자 하는 균을 overnight-culture(12~16h)시킨 후, EP-tube에 1.5ml씩 담고 2분간 centrifuge 시킨다. 그 후, 상층액을 모두 버린다.
    4. Lysozyme buffer 200μl를 넣고, pipetting으로 잘 섞어준다.
    5. 10분간 실내온도로 incubation시킨다. (2~3분마다 가볍게 흔들어줄 것)
    -Cell lysis : Lysis buffer는 세포막을 깨는 용도
    6. GB buffer 200μl를 넣고, 5초간 pipetting 해준다.
    7. 70°C incubator에 준비한 sample을 넣고 10분간 incubation시킨다. (3분마다 가볍게 흔들어줄 것) 이때, D.W를 70°C incubator에 넣어둔다.(elution) 그리고 Collection tube에 GB Column을 미리 끼워 넣고, labeling한다.
    -DNA Binding
    8. 에탄올 (96~100%) 200μl를 넣고, 즉시 vortexing으로 10초간 섞어준다.
    9. EP-tube에 담긴 sample을 준비한 GB Column에 넣는다.
    10. cap을 닫고 2분 30초간 centrifuge (14,000-16,000 x g) 시킨다. 그 후, 걸러진 액체를 버린다.
    -Wash : Column과 Bead에 부착된 DNA 떨어뜨리기
    11. W1 Buffer 400μl를 GB Column에 넣은 후, 2분간 centrifuge (14,000-16,000 x g) 시키고 걸러 진 액체를 버린다.
    12. (에탄올이 첨가된) Wash Buffer 600μl를 GB Column에 넣는다. 2분간 centrifuge (14,000- 16,000 x g) 시키고 걸러진 액체를 버린다.

    참고자료

    · 없음

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    • 1. Active Transposition of Insertion Sequences in Prokaryotes: Insights from the Response of Deinococcus radiodurans R1 to Oxidative Stress
      The topic of active transposition of insertion sequences in prokaryotes, particularly in the context of the response of Deinococcus radiodurans R1 to oxidative stress, is a fascinating area of study in microbiology and molecular genetics. Insertion sequences (IS) are short, mobile genetic elements that can transpose within and between genomes, playing a significant role in genome evolution and adaptation. The ability of D. radiodurans R1, a highly radiation-resistant bacterium, to actively transpose its insertion sequences in response to oxidative stress provides valuable insights into the mechanisms by which prokaryotes can rapidly adapt to environmental challenges. This phenomenon suggests that the transposition of IS elements may be a key strategy employed by certain prokaryotes to generate genetic diversity and enhance their chances of survival under stressful conditions. Understanding the molecular mechanisms underlying this active transposition process, as well as the specific genetic and regulatory factors that govern it, could have important implications for our understanding of bacterial evolution, genome plasticity, and the development of novel strategies for microbial engineering and biotechnology applications. Additionally, exploring the role of IS elements in the stress response of other prokaryotes could shed light on the broader evolutionary significance of these mobile genetic elements in shaping microbial genomes and adaptability. Overall, this topic represents an exciting area of research that has the potential to yield important insights into the fundamental mechanisms of prokaryotic adaptation and genome evolution, with potential applications in fields ranging from environmental microbiology to synthetic biology.

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