Protein Determination and Sampling, Bradford assay 단백질 정량 결과 레포트

소개

생명과학과 전공실험에서 진행한 실험 결과 레포트 입니다:)
A+ 받은 레포트이며 조교님께 완성도있다는 칭찬을 받았던 레포트입니다.

상세하게 적은 부분이 많고 이론, 실험재료나 방법들도 보시면 아시다시피
처음보는 사람도 이해할 수 있게 자세하고 폭넓은 정보를 적으려한게 느껴지실 겁니다.

책을 하나하나 찾아보며 적은 것이기 때문에 참고문헌 각주표시도 되어있습니다.

참고하시면 반드시 도움이 되실거라 생각합니다.
이 보고서를 보신 분은 꼭 A+ 받으시고 좋은 하루 되세요 ㅎㅎ 감사합니다:)

목차

1. 실험목적

2. 실험원리

3. 실험재료 및 방법
1) 실험재료
2) 실험기기 및 장비
3) 실험방법

4. 결과

5. 고찰

6. 참고문헌

본문내용

1.실험목적
이번 실험에서는 세포를 harvest하고 보고자 하는 단백질이 sample내에 얼마나 포함되어 있는지 Bradford assay로 정량화 한다. Standard curve를 그리고 sample 내 단백질 농도를 예측한 뒤 원하는 농도로 western blot sampling까지 진행할 수 있다.

2.실험원리
* Protein determination 과정
보고자 하는 단백질을 정량하기 위한 과정은 크게 cell harvest, cell lysis를 진행한 뒤 Bradford assay와 같은 정량법을 통해 sample내 단백질 농도를 파악하는 것이다. 먼저 Cell harvest한 후 저속 rpm으로 원심분리하여 pellet에 모인 cell을 풀어준 뒤 lysis buffer를 처리한다. Cell lysis 반응시간이 지난 뒤 고속 rpm으로 원심분리하여 supernatant에 존재하는 단백질을 취한다. 이후 이미 농도를 알고 있는 BSA 단백질을 standard로 잡고 sample에 단백질이 얼마나 들어있는지 그래프와 식을 통해 계산한다.

1) HEK 293T Cell
Human Embryonic kidney 293T Cell은 Human Embryonic kidney 293 cell(인간 배아 신장 세포)의 SV40 large T antigen의 돌연변이 유도체인 인간의 cell line(세포주)이다. 이때, SV40 large T antigen(Simian Vacuolating Virus 40)은 진핵생물의 DNA 종양바이러스중에 하나인 Simian virus의 40가 세포내로 도입되어 유래된 산물이자 종양단백질이다. 이것의 기작은 p53 종양억제 단백질에 결합하여 비활성화하여 세포가 바로 S phase를 들어가 DNA 합성을 활성화하게 만든다. 세포를 불멸화하여(immotalized) subculture하면서 세포배양할 수 있도록 유도된 cell line 종류 중 하나이다.

2) MG132
MG132는 proteasome inhibitor이다. Proteasome은 세포내 단백질을 분해할 수 있는 단백질 복합체를 말한다. 세포의 여러 대사과정 중 손상이 되었거나 불필요한 단백질들을 제거하기 위해 이러한 proteasome이 활성 되며 이로 인해 세포내의 항상성을 유지할 수 있도록 돕는다.

참고자료

· 김진회 외2, 2001, 세포배양노트, pp. 100-101, 월드사이언스.
· 김태전 외2, 2004, 세포배양학개론, p. 205, 고려의학.
· 박승택, 1996, 조직세포배양, pp. 51-52, 계축문화사.
· 강호일, 2007, 단백질실험 핸드북, p. 22, 월드사이언스.
· 김승호 외1, 2006, 단백질실험노트(상) 제3판, pp. 24-29, 30-35, 월드사이언스.
· 조경선 외3, 2001, SV40 large T antigen을 이용한 각막내피세포의 증식유도, p. 1331, 가톨릭대학교 의과대학 안과학교실 제42권.