[생명공학] 형질전환동물

소개

^^

목차

형질전환 동물
①. 실험동물
②. 수정란의 준비
③. 외래유전자의 준비
④. 재조합 유전자의 미세 주입
⑤. 대리모의 준비
⑥. 수정란 이식
⑦. 산자의 유전자형 확인

본문내용

형질전환 동물(Transgenic mouse)을 개발하기 위한 방법으로, mouse 수정란(embryo pronucleus)의 웅성 전핵에 DNA를 주입하는 기술로써, 제작한 DNA를 동물에 발현 시켜 형질전환을 야기시키는 방법이다.
①. 실험동물
수정란 공여 및 대리모를 위한 동물로는 생명공학 연구소에서 사육중인 마우스로서, 각 4-6주 령의 것을 실험에 사용한다. 사육조건은 SPF(Specific Pathogen Free)이며, 조명은 12시간씩 dark/light cycle이다. 사료는 무제한 급여하며, 물도 무제한으로 급여한다.
②. 수정란의 준비
다배란 유기를 위하여 PMSG(Prenant Mares Serum Gonadotropin ; Serotropin, Japan)와 HCG (Human Chorionic Gonadotropin : Sigma, USA)를 48시간 간격으로 각각 5 IU씩 교잡종 자성생쥐의 복강 내에 주사한 다음, 동일계통의 웅성생쥐와 1:2로 합사시켜 자연교미를 유도한다. 다음날 아침, 질전의 유무를 확인하여 질전이 있는 개체만을 골라서 경추탈구법 (cervical dislocaton method)으로 도살한 다음 난관을 절취한다. 절취된 난관의 팽대부를 주사바늘로 터트려 난구세포괴(cumulus cell mass)를 회수하며, 회수된 난구세포괴를 300 unit/ml의 hyaluronidase (Sigma, USA) 용액에 2-3분 처리한 후 15,000 rpm으로 약 3분간 원심처리함으로 핵막의 관찰을 용이하게 한다.

참고자료

· 생명공학연구소 http://www.kribb.re.kr