생화학실험 단백질의 정성분석

소개

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목차

1. 실험 제목
2. 실험 목적
3. 실험 일시
4. 조 및 조원
5. 실험 이론
6. 시약 및 기구
7. 실험 방법
8. 실험 결과
9. 고찰
10. 참고 문헌

본문내용

Western blot 이란 단백질을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동을 이용하여 분리하고, 니트로셀룰로오스 membrane에 옮긴 후 찾고자 하는 단백질의 항체(1차 항체)와 결합시킨 후 이 항체와 반응하는 2차 항체를 이용하여 밴드를 형상화 하는 것이다. Western blot 기술은 3가지 요소를 사용하여 복합체에서 특정 단백질을 분리하는 작업을 수행한다. 즉, 크기별 분리, 단백질을 고체 지지체로 이동, 1차 및 2차 항체를 사용하여 표적 단백질을 표시하여 시각화 한다. 특정 표적 단백질을 인식하고 결합 하는 동물 유래 항체 ( 1차 항체 로 알려짐 )가 생성된다. 1차 항체를 인식하고 결합하는 2차 항체가 추가된다. 2차 항체는 염색, 면역 형광 및 방사능으로 특정 표적 단백질을 간접적으로 검출할 수 있다. 다른 관련 기술에는 도트 블롯 분석, 정량적 도트 블롯, 면역조직화학 및 면역세포화학이 포함되며, 여기서 항체는 면역염색 및 효소 결합 면역흡착 분석 (ELISA)에 의해 조직 및 세포의 단백질을 검출하는 데 사용된다.

<중 략>

생리학적 pH에서 Glycine은 쯔비터 이온으로 존재한다. running buffer에 첨가된 Glycine의 Pi는 6.2이며 낮은 pH에서 양전하를, 높은 pH에서는 음전하를 띈다. stacking gel의 pH는 6.8로서 glycine은 약한 음전하를 가진다. Glycine, 단백질, Cl-는 모두 음 전하를 띄어 전기영동에서 (+)극으로 이동하게 된다. Cl-은 항상 음이온이며 분자량이 아주 작기 때문에 가장 빨리 이동하게 된다. Glycine은 stacking gel(pH 6.8)에서 거의 중성에 가까운 – charge를 띄기 때문에 매우 느린 속도로 이동한다. 때문에 Cl-와 glycine간의 이동속도 차이가 생기게 된다. 또 두 이온사이의 높은 전위차로 glycine은 본래보다 빠른 속도로 Cl-이온을 뒤따르게 된다. 이때 이동속도는 glycine<단백질<Cl-이다.

참고자료

· https://en.wikipedia.org/wiki/SDS-PAGE 211117 검색
· https://www.sciencedirect.com/topics/pharmacology-toxicology-and-pharmaceutical-science/zwitterions