생화학실험 DNA추출, PCR, Gel전기영동

소개

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) Genomic DNA
2) B16F10 cell
3) Spin column-based DNA 추출
4) PCR (polymer chain reaction)
5) 전기영동 (Electrophoresis)
6) Buffer
7) DNA staining

4. 시약 및 기구
1) DNA 추출 – B16F10 cell에서 Genomic DNA 분리
2) PCR
3) Agarose gel electrophoresis

5. 실험 결과
1) Agarose gel 전기영동 결과를 첨부하고, 예상되는 결과를 그림으로 나타내기 (product 1 size : 139bp, product 2 size : 788bp)

6. 연구 문제
1) PCR buffer에 MgCl2, KCl이 들어가는 이유
2) PCR cycle 수를 증가시킬 경우, 그래프와 같은 현상이 일어나는 이유
3) Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인
4) TAE buffer에 들어있는 EDTA의 역할

7. 고찰

본문내용

1) Genomic DNA
Genomic DNA는 핵 내에 존재하는 유기체 내의 chromosomal DNA이며 플라스미드와 같은 염색체 외 DNA와 대조적으로 염색체 DNA이다. A, T, G, C의 염기쌍들이 유전정보를 저장하며 사람의 경우에는 32억 개 이상의 염기쌍을 갖는다. 대부분의 유기체는 모든 세포에서 동일한 유전체 DNA를 가지고 있다. 게놈(Genome)은 한 세대의 유기체에서 다음 세대로 전달되는 유전의 생물학적 정보이다. 그 게놈은 유기체의 기능에 필요한 다양한 RNA를 생산하기 위해 전사된다. 전구체 mRNA는 핵의 RNA 중합효소 II에 의해 전사되고, 전령 RNA는 인트론을 제거하기 위해 스플라이싱에 의해 처리되어 전령 RNA(mRNA)에 엑손이 남는다. 추가 처리에는 사전 mRNA에 5' 캡과 폴리(A) 테일 추가가 포함된다. 성숙한 mRNA는 세포질로 운반되어 리보솜에 의해 단백질로 변환될 수 있다. RNA의 다른 종류로는 리보솜 RNA(rRNA)와 전달 RNA(tRNA)가 있다. 이들 유형은 각각 RNA 중합효소 II와 RNA 중합효소 III에 의해 전사되며 단백질 합성에 필수적이다. 그러나 5s rRNA는 RNA 중합효소 III에 의해 전사되는 유일한 rRNA이다.
출처 : https://en.wikipedia.org/wiki/Genomic_DNA
2) B16F10 cell
인간 피부암의 모델로 연구에 사용되는 종양 세포주이다. B16 세포는 전이 및 고체 종양 형성 연구에 유용한 모델이며 전이 연구를 위한 최초의 murine 도구 중 하나이다.
3) Spin column-based DNA 추출
순수한 DNA를 빠르게 추출하는 방법으로 DNA가 특정 조건하에서 고체 상의 실리카에 결합하는 것을 이용한다.
출처 : http://www.bio-helix.com/products/193

참고자료

· https://local.koreasci.com/download/manual/101_kor.pdf
· https://ko.wikipedia.org/wiki/%EA%B2%94_%EC%A0%84%EA%B8%B0_%EC%98%81%EB%8F%99%EB%B2%95