분자유전학(Plasmid, PCR) 레포트

목차

1. Agarose gel 전기영동
1) 실험원리
2) 예상결과

2. Competent cell preparation
1) 실험원리
2) 예상결과

3. Ligation, Transformation
1) 실험원리
2) 예상결과

4. Mini pre
1) 실험원리
2) Mini-preparation에 사용되는 solution 1,2,3의 각 조성과 그 역할
3) 예상결과

5. Primer 제작 및 PCR 결과
1) 실험결과
2) AT4G34150유전자의 mRNA서열, 1427bp (*Genbank는 RNA염기도 T로 표시한다.)
3) Primer3와 Oliga Calc 사용결과
4) 고찰

6. Primer 제작 및 PCR
1) 실험원리
2) 예상결과

본문내용

Agarose gel 전기영동의 원리)
Agarose는 해초에서 추출한 당의 중합체로서 D-galactose와 3,6-anhydro-L-lactose가 교대로 연결된 구조이다. 보통 실험실에서는 분말 형태가 가장 흔하며 적절한 buffer에 적정 농도로 넣어 끓인 후 식히면 사용하기 적절한 gel로 굳어진다. 전하를 띄고 있는 분자에 일정한 전기장을 가했을 때, 그 분자는 반대쪽 극성을 띤 전극 쪽으로 이끌리는 힘을 받는다. 이런 방법으로 물질을 분리하는 기술을 전기영동(electrophoresis)이라고 한다. 이때 분자들이 이동할 때 특정한 매질을 통과하게 하는데 Agarose gel이 그 역할을 한다.
loading dye와 EtBr의 역할)
Dye는 염색약 역할을 한다. DNA는 눈에 보이지 않을 정도로 작기 때문에 전기영동을 실시하더라도 DNA를 관찰하기 위해 필요한 요소다. EtBr은 실험실에서 많이 사용되는 가장 대표적인 staining dye다. 얇은 판 모양의 고리화합물로, DNA나선 염기 사이에 들어가 결합하는 특징이 있어 강력한 발암물질 겸 돌연변이의 원인이 된다. 자외선에 노출되면 결합한 DNA에서 가시광선으로 변화시키기 때문에 발광된 모습을 확인할 수 있다. 위에서 언급한 것처럼, 유해하기 때문에 취급 시 글러브와 마스크를 착용해야 하며 사용 후 폐기해야 한다. *DNA의 이동속도를 10~15% 감소시키기도 한다.

참고자료

· CooperᐧHausman, The Cell (A Molecular Approach) 7th Edition, sinauer Oxford, 2018, P127
· Plasmids 101: Restriction Cloning, www.addgeneblog
· yourgenome-DNA replication-3D, Youtube
· 안홍선, Gene cloning-Plasmid DNA분리, 단국대학교 생리생화학실험실
· 이미경ᐧ김혜련, 실시간 중합효소 연쇄반응검사와 아가로오스겔 전기영동에 의한 중합 효소 연쇄반응물의 정량검사 비교, 중앙대학교 의과대학 진단검사의학교실
· PCR Master Mixes - gold biotechnology, Youtube
· CooperᐧHausman, The Cell (A Molecular Approach) 7th Edition, sinauer Oxford, 2018, P135~136