생물화학공학이론및실험 결과 PCR (Polymerase Chain Reaction)

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최초 등록일
2018.11.18
최종 저작일
2015.06
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목차

1. Abstract

2. Experiment
1) 시약 및 장치
2) 실험방법

3. Result & Discussion

4. Conclusion

5. Reference

본문내용

이번 실험의 목적은 miniprep을 통해 추출한 Plasmid DNA를 PCR(중합효소 연쇄 반응)법을 통해 증폭시켜 전기영동으로 확인하는 것이었다.
PCR은 시험관내에서 DNA중합효소(polymerase)의 연속적인 반응에 의하여 특정 DNA의 단편을 빠르게 증폭하기 위한 일련의 과정으로, 그 결과 하나의 출발 DNA단편 분자로부터 수백만 개로 복사하여 증폭시킴으로써 많은 양의 순수한 시료를 얻을 뿐 아니라 유전자 분리를 위한 다양한 접근 방법을 제공한다.
실험결과 우리가 원했던 gene의 크기인 2.5kbp의 유전자 대신에 1.7kbp의 유전자 밴드를 전기영동을 통해서 확인할 수 있었다. 이는 플라스미드에 형광 단백질 발현 유전자인 eGFP가 삽입되지 않아서 그 나머지 부분만이 PCR이 되었기 때문일 것이다. 또한 작은 size의 DNA 밴드가 아래 두껍게 나타났는데, 이는 Primer의 Annealing Temperature (Ta), 또는 Primer의 농도등의 조건으로 인해 프라이머 이량체(Primer dimer)가 생성되었기 때문이다.

참고 자료

“생물화학공학이론및실험” 실험노트
실험기기 이론과 실제, 김옥진, 문운당, p118~126, (2013).
진단 분자 생물학, 강희규 외 8인(공), 현문사, p180~196, (2006).
분자 생물학 실험서, 김영희, 월드사이언스, p157~p160, (2008).
유전공학의 이해, 남상욱 외 2인(공), 라이프사이언스, p122~p130, (2013).
T.A.Brown, 『유전자 클로닝과 DNA 분석』, 월드사이언스, p147~p160, (2012).
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