유전발생생물학실험_Western blot

소개

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목차

1. 서론

2. 재료 및 방법
1) 재료
2) cell harvest 방법
3) protein extraction 방법
4) protein assay 방법
5) SDS-Page 준비 방법

3. 결과

4. 재료 및 방법
1) 재료
2) SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate –Polyacrylamide Gel Electrophoresis)
3) Western blot

5. 결과

6. 논의

7. 참고문헌

본문내용

세포 배양은 생물체로부터 분리한 세포를 분리하여 배양하는 과정이다 (강영희, 2008). 생체조직을 무균적으로 선발해서 트립신이나 프로나아제 등의 소화효소로 처리하여 단세포로 분리하여 초대배양을 한다 (강영희, 2008). 또 계대중인 세포계 나 세포주를 같은 효소처리로 분산시켜 얻어낸 단세포를 증식배지에 이식, 접종하 여 다음의 계대배양을 한다 (강영희, 2008). 초대배양세포는 정상성질을 갖고 있으 나 계대함에 따라 증식능, 염색체, 형태 등의 변화(형질변환)를 수반하여 종양성을 갖게 된다 (강영희, 2008). 그 세포의 유래조직에 있던 분화기능은 때로는 소실하 기도 한다. 최근에 이 분화기능을 유지한 세포주가 다량으로 수립되고 있다 (강영 희, 2008). 본 실험에서 사용하는 세포주는 HeLa cell로, 사람의 자궁경부암 조직 에서 얻어낸 세포주로 현존하는 인체에서 유래한 조직배양주 중 가장 오래 전에 분 리한 것이다 (강영희, 2008).
단백질체는 유전체에 의해 암호화된 모든 단백질 세트, 혹은 어떤 생물체에 존재하 는 모든 단백질 총체를 의미한다 (Clark·Pazdernik, 2014). 많은 단백질은 다른 단백질들에 의해 가공되고 수정된다 (Clark·Pazdernik, 2014). 따라서 최종 단백 질 총체는 성장 조건에 따라 변하는 단백질 간의 복잡한 상호작용에 의존한다 (Clark·Pazdernik, 2014). 유전자 발현을 종종 mRNA를 추적하여 조사하지만, 그것 이 최종 유전자 산물인 단백질의 양과 활성도에 일치하는 것은 아님으로 이들을 추 적할 필요가 있다 (Clark·Pazdernik, 2014).
세포에서 원하는 단백질을 얻기 위해서는 적합한 방법을 선택해야 한다. 세포로부 터 단백질을 추출하는 방법에는 homogenization(물리적 힘을 가해 파쇄), 초음파 처리, 급속동결과 용해를 수회 반복하여 세포막을 손상시킨 후 세포를 파쇄하는 방 법, 계면활성제를 사용하여 세포막을 포함한 주성분을 모아 추출하는 방법이 있다 (강전아인·미야자키, 2017). 본 실험에서는 계면활성제를 사용한 방법을 활용한 다.

참고자료

· 강영희. 2008. 생명과학대사전. 아카데미서적, pp.808-809, p.1798.
· 강전아인·미야자키. 2017. 단백질 실험노트 상. 바이오사이언스, pp.20-25. pp.40-45.
· 강전아인 외 2명. 2017. 단백질 실험노트 하. 바이오사이언스, pp.17-24.
· 김준 et al. 2019. 생화학 분자생물학 실험서. 범문에듀케이션, pp.131-137.
· 김영희. 2011. 분자 생물학 실험서. 월드사이언스, pp.205-211.
· Clark·Pazdernik. 2014. 분자생물학. 월드사이언스, pp.460-466.
· 강성구 외 4명. 2003. 대장암 조직에서 Western Blotting을 이용한 Survivin의 발 현. Annals of Coloproctolgy 19(6), pp.386-390.
· 강전아인·미야자키. 2017. 단백질 실험노트 상. 바이오사이언스, p.37.
· 강전아인 외 2명. 2017. 단백질 실험노트 하. 바이오사이언스, pp.3-29.