Gene silencing - Plasmid DNA isolation(Mini Prep)

소개

Vector cloning의 Plasmid DNA isolation(Mini Prep) part를 실험한다.

목차

Ⅰ. Introduction 실험 원리
Ⅱ. Material & Method 실험 재료 & 방법
Ⅲ. Result 실험 결과
Ⅳ. Discussion 고찰
Ⅴ. Reference 참고문헌

본문내용

Ⅰ. Introduction
1. 실험원리
1) Gene cloning (유전자 클로닝)
유전자도서관에서 원하는 유전자를 선발하는 것을 뜻한다. 선발방법은 원하는 유전자를 포함하고 있는 유전자집단을 숙주세포 내에서 파지나 플라스미드 등의 자기증식이 가능한 매개체에 끼워 넣어 재조합DNA를 제작한다. 다음에 재조합DNA를 대장균 등의 숙주세포에 이식하여 숙주를 형질전환시킨다. 형질전환된 세포집단에서 원하는 유전자를 포함하고 있는 것을 선발하는 것이다. 형질전환된 숙주를 배양해서 얻는 세포집단은 원하는 유전자 외의 DNA를 포함하는 것이 대다수이므로 원하는 유전자에 관한 정보 등을 지표로 하여 원하는 재결합DNA를 포함하는 클론을 분리해야 할 필요가 있다.

2) Gene Silencing (유전자 침묵)
유전자의 염기배열을 변화시키지 않고, 그의 발현을 인위적으로 억제하는 것 및 자연에 발생하는 발생억제도 지적하며, 유전자 전사단계에서인 억제와 전사 후 억제 등을 포함한다. RNA분자를 표적으로 하여 유전자 발현억제가 생기는 경우에는 RNA침묵(RNA silencing)이라고 부르며, 표적RNA에 상보적인 뉴클레오티드배열로 구성되는 두 가닥 RNA가 특이적인 RNA가수분해효소Ⅲ에 의해 절단되어 생성되는 짧은(21~25 뉴클레오티드)의 RNA분자가 표적RNA분자 절단 또는 번역저해를 야기한다. 또 siRNA의 안테센스(antisense)사슬이 크로마틴 DNA에 작용하여 그 결과 크로마틴 변환복합체가 특정한 촉진인자영역을 표적으로 하여 작용하는 것으로서 헤테로크로미틴 형성을 하게 되어 전사단계에서 유전자발현이 억제된다.
즉, 유전자기능 해석 등에 널리 이용하게 된다. 유전자침묵은 유전자조절(gene knockout)과 비교하면 조작이 간편하다는 것과 동시에 짧은 시간 내에서도 발현억제효과를 얻어낼 수 있다는 것

참고자료

· 강영희, 생명과학대사전, 2008년, 아카데미서적
· 이병무, 유전자 클로닝과 DNA 분석, 2012년, 월드사이언스
· 최석용, 손을 잡고 가르쳐 주는 DNA 클로닝, 2011년, 전남대학교출판부
· 이정주, 유전학원론, 2013년, 월드사이언스
· 전방욱, DNA 혁명 크리스퍼 유전자가위, 2017년, 이상북스
· 이혜미, 유전자 치료 방법 및 연구 동향, BRIC View 2016-T22, Oct 6, 2016
· Ong, Chin-Tong, and Victor G. Corces. “CTCF: an architectural protein bridging genome topology and function.” Nature reviews Genetics 15.4 (2014): 234.