Transformation & Colony PCR 생물공학실험 보고서

소개

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목차

Ⅰ. 11주차 예비보고서 (Transformation)
1. Transformation을 수행하는 목적이 무엇인지 설명하시오.
2. Competent cell의 개념과 특징에 대해 설명하시오.
3. Transformation 실험 진행 시 주의사항에 대하여 세 가지 이상 논하시오.

Ⅱ. 12주차 예비보고서 (Colony PCR)
1.Colony PCR을 수행하는 과정에서 colony를 pick한 후 여분의 LB Agar Plate에 streaking하여 replica를 제작한다. 이 Replica가 어떻게 활용될 수 있는지 설명하시오.
2. Colony PCR은 Insert가 Vector에 제대로 cloning이 이루어졌는지 확인하는 데 그 목적이 있다. 이를 달성하기 위해 primer를 vector의 위치에 따라 다양하게 design할 수 있는데, 어떤 전략이 있을 수 있는지 제시하고 각 전략의 장단점을 비교하시오. (단, 아래의 이미지는 실험에서 사용한 Vector중 MCS의 일부분이다)

Ⅲ. 11, 12주차 통합 결과보고서
1.실험 목적 [10]
2.다음에 대해 간단히 설명하시오
3.실험 결과 (Transformation) [10]
4.실험 결과 (Colony PCR) [10]
5.결론 및 고찰 [50]

본문내용

11주차 예비보고서 (Transformation)
1. Transformation을 수행하는 목적이 무엇인지 설명하시오.
: Transformation은 외래 DNA 단편분자가 세포에 도입이 되어 새로운 유전적 형질이 발현되도록 하는 방법으로, 주로 박테리아와 plasmid를 통해 유전자를 도입하는 기술로 사용되었지만 transfection과 같은 동물 및 식물에서도 이 기술이 사용되고 있다. 즉 알지 못했던 유전적 형질을 본래의 알고 있는 유전적 형질을 갖은 세포에 이 기술을 도입시키면 알지 못했던 유전적 형질을 알 수 있다. 이 목적을 수행하기 위해 미생물의 유전자를 조작을 해야하는데 실험실에서 인공적으로 외래의 DNA를 받아들일 수 있는 Competent cell으로 만들어야 한다.
2. Competent cell의 개념과 특징에 대해 설명하시오.
: Competent cell은 외부의 DNA를 받아들일 수 있게 실험실에서 인위적으로 만든 세포로, 주로 화학적 방법과 전기천공법을 사용한다.

<중 략>

12주차 예비보고서 (Colony PCR)
1.Colony PCR을 수행하는 과정에서 colony를 pick한 후 여분의 LB Agar Plate에 streaking하여 replica를 제작한다. 이 Replica가 어떻게 활용될 수 있는지 설명하시오.
- Replica는 원하는 유전자를 넣은 Vector을 가지고 있는 colony로서 이 colony를 가지고PCR을 수행하여 원하는 Vector 속 유전자를 대량으로 얻을 수 있다. 예를 들어 치료효과가 뛰어나지만 적은 생산량으로 치료제가 널리 사용되지 못 했던 약물을 치료 효과가 존재하는 유전자가 들어있는 부분을 Replica를 이용해 다량으로 복제하여 약물의 생산량을 증가시키거나, 숙주가 가지고 있지 않는 특성을 이용해 replica가 가지고 있는 특성을 알아낼 수 있다. (ex) 병원체로서 질병을 유발하는지, 독성을 가지고있는지 등

참고자료

· https://www.promega.kr/products/cloning-and-dna-markers/bacterial-strains-and-competent-cells/#:~:text=and%20replicating%20plasmids.-,E.,chemically%20competent%20cells%20and%20electroporation.
· https://international.neb.com/products/competent-cells
· https://www.ibric.org/search/?category=LABINFO&subcategory=EXPQNA&kwd=PCR+primer+design&pageNum=3&pageSize=20&sort=DATE&reSrchFlag=false&detailSearch=false&preKwd%5B0%5D=PCR+primer+design
· https://www.addgene.org/vector-database/2485/
· https://www.addgene.org/vector-database/6496/?gclid=Cj0KCQiAk53-BRD0ARIsAJuNhpstzkGbJeLPBFCiyFQ-llvOEkJ0iJ33ddHesjux4Md1RvuN27m2xuMaAoTTEALw_wcB