ELISA 실험 보고서 (원리, 실험 과정, 결과 분석, 그래프)

소개

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목차

1.Background

2. Materials

3. ELISA Process : 실험 과정
1)용액 준비하기
2)Capture antibody coating
3)Washing
4)Blocking
5)Washing
6)Antigen incubation
7)Washing
8)Detection antibody incubation
9)Washing
10)NA-HRP incubation
11)Washing
12)Substrate incubation
13)Stop solution

4. Result (ELISA 결과) 표 및 그래프

5. Discussion : ELISA 결과 해석 및 고찰

6. 결론

본문내용

ELISA란 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay의 약자로, 효소를 항체나 항원에 결합시켜서 효소의 활성을 측정함으로써 항원-항체 반응의 강도와 양을 정량적으로 측정하는 방법으로 오늘날 가장 많이 사용되는 면역정량법이다. EILSA는 크게 Direct, Indirect, Sandwich, Competitive EILSA와 같이 총 4가지로 나뉜다.
Direct ELISA는 항원과 반응할 항체에 바로 효소를 결합시켜 사용하는 방법이다. 항원이 고정되어 있고, 1차 항체만을 이용해 항원 농도를 검출하거나 정량화한다. 이렇게 최소의 절차를 이용했기 때문에 2차 항체와의 교차 반응을 막을 수 있다는 장점이 있다. 하지만 모든 1차 항체를 표지해야 하기 때문에 항체가 표지 목적으로 적합해야 하며 실험 비용이 높다.
Indirect ELISA는 1차 항체를 표지하는 것이 아니라 1차 항체를 인식하는 2차 항체에 효소를 결합시켜 이를 검출하여 정량화하는 방법이다. 이 방법을 사용하면 2차 항체로 신호를 증폭할 수 있고, 다양한 분석을 위해 사용할 수 있다. 하지만 2차 항체의 부가적인 교차 반응이 발생할 수도 있다.
Sandwich ELISA는 어떤 항원에 대한 항체를 플레이트에 먼저 결합시키고, 그 항체에 항원을 결합시킨 다음 직접, 간접적인 방법으로 조사하는 방법이다. 항원의 양이 적거나 미지의 샘플을 조사할 때 주로 사용한다. 항원 특이성이 매우 높고 민감하여 항원을 굳이 정제하지 않아도 된다는 장점이 있다. 단 항원에 최소 2개 이상의 항체 결합 자리가 존재해야 한다.
이 때 주요 실험과정은 다음과 같다. 제일 먼저 플레이트를 capture antibody로 코팅한다. 이후 이에 맞는 항원을 항체와 결합시킨다. 그리고 detection antibody를 첨가시켜 항원에 결합하도록 한다. 그 다음 순서로 enzyme-linked antibody를 첨가하여 detection antibody에 결합한다.

참고자료

· ELISA 실험 방법
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=13&page=2
· Monoclonal Antibody
· http://www.komabiotech.co.kr/www/board/board_viewing.phtml?no=553&page=69&type=tboard_board1
· Sandwich ELISA principle
· https://www.sinobiological.com/category/sandwich-elisa-principle
· ELISA 기술
· http://www.dynebio.co.kr/yc/bbs/board.php?bo_table=data1&wr_id=13&page=2
· 피펫팅 오류
· https://www.artel.co/learning_center/pipetting-technique-as-source-of-error/
· ELISA washing
· https://www.elisagenie.com/elisa-plate-washing-tips-kr