bacteria plasmid를 추출하여 sac1 제한효소 처리, yeast gDNA에서 SAE2 gene 유무 확인, 플라스미드 추출 후 제한효소 처리하기, 유전자 존재 확인하기

소개

실험 과목에서는 A+을 놓쳐본 적이 없습니다.

목차

1. Title
2. Introduction ( plasmid DNA, sac1, plasmid DNA confirm, yeast gDNA, PCR, PCR confirmation of gene deletion in genome, electrophoresis, Etdr, 시약 역할)
3. Materials & Methods
4. Result (사진 있음)
5. Discussion

본문내용

▶ Title
-서로 다른 plamid를 가진 두 종류의 bacteria에서 이를 추출한 뒤, 제한효소sacǀ을 처리하여 PCR로 결과를 확인한다.
-yeast에서 gDNA를 추출하여 진행한 PCR을 통해 SAE2 gene의 유무를 확인한다.

▶ Introduction
● Plasmid DNA
자연에서, 서로 다른 bacteria 간 유전정보 교환을 통해 환경에 적응하고자 circular 형태로서 transfer가 쉬운 plasmid DNA를 가지고 있다.
이런 독특한 구조와 특징을 지닌 DNA를 생물학실험에 적용하고자, bacterial plasmid에서 유해한, 불필요한 성분을 제거한 뒤 필요한 부분 (AmpR, LacZ, replication origin, multiple cloning site 등)만 남긴 plasmid를 분자생물학을 비롯한 다수의 생물학 분야에서 이용 중이다.
특히 어떠한 생명체에서 얻은 유전자를 다른 생명체로 옮기는 cloning 과정에서 plasmid를 자주 활용한다.
Plasmid와 Vector?
Plasmid는 독자적으로 증식할 수 있는 circular gene이고, vector는 이를 인공적으로 변형시켜 foreign genetic material을 다른 cell로 운반할 수 있는 carrier이다.

● sac1
화살표 부분을 인지하는 제한효소로 37도에서 가장 활성을 띄며 6개의 site를 직접 인식하고 자른다.

- 두 종류의 bacteria에서 추출할 두 plasmid(vector)

왼쪽의 plasmid는 sac1에 의해 잘리는 부분이 1개이고 오른쪽의 plasmid에는 LEU2가 삽입되어있어 sac1에 의해 두 부분이 잘린다.(Leu2 내에도 sac1에 의해 잘리는 restriction site가 존재한다.)

● Plasmid DNA confirm

원하는 유전 정보가 들어간 plasmid를 얻고자 실험(cloning)을 진행한 뒤
얻어진 plasmid가 원하는 유전정보를 지니고 있는 지 확인을 하는 방법으로는 sequencing, enzyme mapping이 있다.

참고자료

· 수업자료, http://www.en.wikipedia.org
· http://www.neb.com