A+, 학과수석- DPPH assay 보고서

소개

학과수석, 평점 4.5 , 실험과목 전부 A+ 작성자입니다.

DPPH Assay를 이용해 다양한 항산화물질의 항산화능을 비교하는 실험입니다. 항산화능의 문헌값을 찾아 이론값과 실험 데이터를 비교했으며 관련한 이론도 충분하게 작성하였습니다. 따라서 예비/결과 보고서 모두 수월하게 작성하실 수 있습니다.

목차

1. 실험방법
2. 실험결과
3. 고찰
4. 참고 문헌

본문내용

Ⅰ. 실험 방법
250μM DPPH solution 10ml와 Standard인 20mM stock L-ascorbic acid를 물로 희석하여 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25 μL 0.5ml씩 E-tube에 만든다.
Sample 또한 에탄올로 희석하여 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25 μL 5구간의 농도 샘플을 0.5ml씩 E-tube에 만든다.
①에서 만든 250 μM DPPH solution을 0.5ml씩 ②, ③에 각각 반응시킨다.
암실에서 20분 반응시킨 후 UV spectrometer를 사용하여 517nm에서 각각의 Absorbance값을 측정한다.

<중 략>

Ⅲ. 고찰
이번 실험에서 사용한 DPPH는 보라색을 띠며 환원되면 노란색이 된다. 각 시약의 변색 후 사진을 보면 Tocopherol, Gallic acid는 시약의 농도가 높을수록 노란색을 띠는 것을 볼 수 있다. 즉, 시약의 농도가 높을수록 환원된 DPPH양이 증가하고 노란색을 띠게 된다. 그러나 standard인 Ascorbic acid와 Naringin을 보면 농도와 색 간의 규칙이 없는 것으로 나왔다. 실제로 Ascorbic acid와 Naringin은 항산화능을 가지고있기 때문에 Tocopherol과 Gallic acid와 같은 결과가 도출되어야한다. 이 같은 실험상의 오차가 발생한 이유에 고찰해보면 다음과 같다.
첫 째, 미량의 농도 시약을 사용하기 때문에 정확한 농도를 만들지 못했다. 처음 실험을 할 때 여러 종류의 피펫을 사용하다보니 최종 부피가 1ml여야할 때 시약마다 약간의 차이가 있었다. 그러나 연속 희석법을 사용하여 시약을 희석하였기 때문에 그래프의 양상은 양의 기울기를 가진 1차 함수 형태가 나와야한다. 여기서 연속 희석법은 고농도의 시약을 제조한 후 조금씩 희석시키며 서로 다른 농도의 샘플을 제조하는 것이다. 따라서 최초로 만든 샘플의 농도가 정확히 200uM이 아니더라도 연속해서 희석한 비율이 비슷하다면 1차함수 추세선이 나와야한다.

참고자료

· 동국대학교 화공생물공학과, “화공생물공학실험”, 2019, p10-11
· 강치욱, “생물학총론2”, 배움, 2017, p198-211
· Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko 외 3인, 생화학, 범문에듀케이션, 2018
· 생명과학대사전, 초판 2008, 개정판 2014, 도서출판 여초
· 손장락, “활성산소와 황산화제”, 바이오메디컬, 2008, p34