Enzyme activity assay

목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Result
4. Discussion

본문내용

1. Abstract
이번 실험은 세포들이 만들어내는 생성물의 농도를 UV spectrophotometer를 이용하여 흡광도를 측정하여 효소의 활성을 알아보는 실험이다. 여기서 pNPB에 CalB를 넣어 p-Nitrophenol과 butyric acid이 생성된다. 이때, CalB 효소를 넣은 실험군과 넣지 않은 대조군의 흡광도를 시간에 따라 405nm에서 측정을 하였다. 흡광도와 식을 이용하여 생성 물질의 농도를 구하여 효소의 효소 활성을 알아보았다.

2. Experiment
 시약 및 장치
- Candida antarctica lipase B solution(CalB) : Candida antarctica로부터 분리한 지방분해효소인 lipase의 한 종류이다. 지방의 ester기를 수화반응을 유도하여 지방산과 글리세롤로 분해할 수 있다. 또한 반대 반응인 ester화 반응에도 관여하는 효소이다. 높은 선택성과 높은 촉매 활성을 가지기 때문에 산업적으로 향료, 계면활성제, 바이오 디젤 등 다양한 반응에서 촉매로 사용된다. Lipase의 수화 반응을 응용하여 Figure 1과 같은 반응식을 이용하여 p-Nitrophenol(노란색)의 생성을 UV로 관찰하여 활성도를 측정한다.
- 50mM p-nitrophenyl butyrate(pNPB) : 니트로기()로 치환된 페놀성 에스테르 화합물이다. 이번 실험에서 lipase 효소의 기질로 사용되며 pNPB는 CalB에 의해 가수분해되어 p-Nitrophenol과 Butyric acid를 생성하며 p-Nitrophenol에 의해 노랗게 변한다. 이는 효소 없이도 광분해가 일어날 수 있으므로 빛 노출에 주의하여야 한다.
- 50mM Tris-HCl buffer(pH 7.5) : 생물학적 용액에 사용하는 완충제이다. 오래 두어도 안정하고 순도가 높아 널리 사용된다. Tris buffer를 HCl로 적정하여 원하는 pH로 만들 수 있으며, 이렇게 HCl로 적정된 Tris buffer를 Tris-HCl buffer라고 한다.

참고자료

· “2019 생물화학공학이론 및 실험” 실험 노트
· 위키백과, 두산백과
· Gary D.Christian 외 2명, 2015, “분석화학”, 자유아카데미, p475-477, 492-496
· Campbell 외 4인, 2011, “생명과학”, 바이오사이언스, p272-285
· 효소의 활성 측정&효소 활성 분석 및 측정_한국의과학연구원 미생물분석센터