western bolt

소개

"western bolt"에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험목적
2. 실험과정 및 원리
3. western blot외에 단백질의 발현, 위치를 확인할 수 있는 실험방법
4. References

본문내용

실험목적
sample(total protein)을 SDS-PAGE를 이용해 분리하고 이 단백질을 membrane에 tranfer후 antigen-antibody reaction을 시켜 발광을 유도함으로써 특정 단백질을 detection한다.

실험과정 및 원리
- SDS-PAGE (SDS polyacrylamide gel electrophoresis)
SDS를 처리한 단백질을 전기영동으로 크기(분자량)별로 분류한다.
Sodium Dodecyl Sulfate, SDS는 음이온 계면활성제로써 아미노산의 곁사슬끼리의 상호작용을 방해하여 단백질을 변성시킨다. SDS는 단백질에서의 이온결합이나 소수성 상호작용을 방해하여 단백질의 3차원 구조를 풀어 선형으로 만들고 곁사슬에 따라 다른 전하를 음전하로 바꿔준다.[1] 이에 polyacrylamide gel을 통과하는 속도가 단백질의 분자량이 작을수록 빨라지게 되어 단백질을 크기(분자량)에 따라 분리할 수 있게 된다.[2]
1) SDS-polyacrylamide gel을 만든다.
2) Gel unit을 setting한다.

참고자료

· Ninfa, Alexander; Ballou, David (1998). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology. Hoboken, New Jersey: John Wiley & Sons. p. 129.
· Towbin, H., Staehelin, T., and Gordon, J. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76, 4350–4354.
· Mahmood, Tahrin; Yang, Ping-Chang (September 2012). "Western Blot: Technique, Theory, and Trouble Shooting"