Lowry protein assay (단백질 정량 분석) 예비

목차

1. 실험 목적
2. 바탕 이론
3. 실험 기기 및 시약
4. 실험 방법
5. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
단백질을 정량화 할 수 있는 여러 방법 중 특정 시료를 활용한 UV method, BCA method, Lowry method, Bradford method 등의 이론적 특성을 파악한다. 본 실험에서는 Folin & Ciocalteu’s Phenol reagent을 활용한 Lowry method를 활용한 단백질 정량 실험을 진행할 것이다. 초기에는 Lowry method을 활용하여 다양한 농도의 BSA 용액의 색 변화를 파악하고, 이를 spectrophotometer를 활용하여 특정 파장대를 설정하여, 해당 파장에서의 흡광도를 측정하고, 이를 활용하여 BSA curve를 제작한다. 후에, 미지의 단백질을 동일한 Lowry method를 활용하여 용액의 색 변화를 관찰하고, 제작한 BSA curve를 활용하여 해당 미지 단백질 용액 내의 단백질 농도를 구하는 방법으로 실험이 진행된다.

<중 략>

⑤ UV/Vis 분광 광도법
분광 광도법을 측정 물질의 농도를 빛을 활용하여 파악하는 방법이다. 즉 이는 특정 파장에 다르게 실험이 되는데, 본 실험에서는 UV를 통한 실험을 진행 할 것이다. UV/Vis 분광법은 UV 분광 광도계를 통해 얻어진다. 일반 화학에서 기초적으로 배웠듯이, 안정한 분자 구조는 외부의 힘이나 빛에 의하여 분자가 들뜬 상태로 바꿔 내부 에너지가 증가하는 형태를 나타낸다. UV 분광 광도계는 이런 유사한 과정으로, 측정 물지에 UV를 쏘아 해당 물질의 전자들이 높은 에너지 준위의 오비탈로 이동시켜 내부에너지를 증가시키는 방법을 기초로 하고 있다. 이 때, 광도계 내에 큐벳에 들어 있는 물질 내의 시료가 빛을 흡수하면 반사되어 나오는 빛의 복사 세기는 흡수된 양에 비례하여 감소하게 된다. 이러한 UV 분광 광도계 내의 일련의 과정을 간단한 모식도로 나타내면 다음과 같이 나타난다.

참고자료

· 한국생산기술연구원(www.ecolab.re.kr)
· William L.Masterton Cecile N. Hurley Edward J.Neth, 화학교재연구회 옮김, 2014. 마스터톤의 일반화학(제7판), 사이플러스,347~361쪽
· McMurry Fay, 2013, 화학교재편찬위원회, 핵심 일반화학(제6판), 자유아카데미, 115~116쪽
· Gary D. Christian, 2008, 분석화학교재연구회, 분석화학(제6판), 자유아카데미, 578~585쪽
· Daniel C. Harris, 2017, Quantitative Chemical Analysis, 분석화학 제9판, P476~483
· 전현숙, 단백질 정량을 위한 형광 염료의 합성과 특성에 대한 연구, 성균관대학교, 6~9p 13p, 2004
· 화공기초 이론 및 실험2 실험 노트