분자생물학실험 (분생실) Cryosection, Immunohistochemistry 레포트 입니다.

소개

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목차

(1) 서론
1) 실험날짜(Date)
2) 실험목적(Purpose)
3) 이론적배경(Principle)

(2) 재료 및 방법
1) 실험재료(Materials)
2) 실험방법(Method)

(3) 실험결과(Result)

(4) 논의(Discussion)

본문내용

2) 실험 목적 (Purpose)
- Cryosection의 정의와 특징에 대하여 알아본다
- Immunohistochemistry(IHC)의 정의와 특징에 대하여 알아본다.

3) 이론적 배경(Principle)
- Cryosection 정의 ; Cryosection은 microtome을 이용하여 frozen tissue를 낮은 온도에서 일정한 두께로 잘라, 이어지는 실험을 위한 시료를 준비하는 방법이다.

- Cryosection 특징
가. Paraffin or resin-embedded section과의 비교
1. 장점 ; 항원성(antigenicify)의 유지가 잘 된다. Dehydration 과정이 필요하지 않기 때문에, 비교적 짧은 시간 내에 sectioning/labeling/observation 할 수 있다.
2. 단점 ; 물리적으로 보다 불안정한 시료를 얻게 된다
나. Cryoprotectant ; Sucrose는 대표적인 cryoprotectant인데, 급속 냉각 시 얼음 결정의 형성을 최소화하고, 형태의 손상을 막는다. 주로 30% sucrose 용액에 담가두었다가 사용한다.
다. 이론과 방법은 명확한 편이나, tissue fixation, anti-roll plate의 간격, 습도, chamber와 chamber 밖의 온도차이 등의 다양한 요인에 따라 실험 결과가 극명한 차이를 보일 수 있는 만큼 실험 전 과정을 예민하게 진행해야 한다.
라. 이어지는 실험에 따라 적정한 두께로 설정하여 section한다. (우리 실험에서는 20nm)
마. Cryosectioning temperature ; Cryostat chamber의 optimal temperature은 sectioning tissue의 성질, frozen 방법(fresh/prefixed with cryosectioning에 따라 달라진다.) , frozen block을 -70’C freezer에서 꺼내어 cryostat chamber에 30분쯤 두어 온도가 평형을 이룰 수 있도록 한 후 실험을 실시한다.

참고자료

· https://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=DBX1
· http://dshb.biology.uiowa.edu/2H3
· Buchwalow, IgorB / Immunohistochemistry / springer / 2010 / 19-46pg
· Asubel, Fredirick M / Current Protocols In Molecular Biology / Wiley / 2003 / pp14.6.1-13