Ligation - 예비,결과,레포트,보고서

목차

1. 실험목적
2. 실험이론
3. 시약 및 기구
4. 실험방법
5. 실험결과 및 고찰
6. 참고사항

본문내용

1. 실험목적
- 저번 실험에서 증폭된 PCR product를 T-vector에 삽입한다.
- Ligation에 관련된 화학 반응을 이해하고 T-vector와 PCR product의 ligation 원리를 이해한다.

2. 실험이론
Gene cloning은 유전적으로 동일한 다수의 DNA 분자를 생산하는 것으로 재조합 DNA 기술을 위해서는 원하는 뉴클레오티드 서열을 다수 만들어야 하는데 이것을 이용하는 것이다. gene cloning의 과정은 다음과 같은 4가지 과정으로 이루어진다.
Step 1. 유전자를 설정하고 그 유전자를 얻어낸다.
Step 2. 얻은 유전자를 vector에 삽입한다.
Step 3. 유전자가 삽입된 vector(recombinant DNA)를 bacteria 세포 내로 주입한다.
Step 4. Bacteria 중에서 올바르게 만들어진 clone을 확인하고 선택한다.
여기서 우리가 할 실험은 Step 2. 이다.

◉ Step 2. Ligation
ligation은 DNA를 자르고 붙여서 새로운 DNA를 만드는 것이다. 가위와 풀을 이용해서 종이를 잘라 붙이는 것과 같다. 여기에서 가위에 해당하는 것이 restriction enzyme이고, 풀에 해당하는 것이 DNA ligase이다. DNA ligase가 하는 일은 phosphodiester bond를 연결시켜 주는 것이다.
여기서 사용되는 restriction enzyme은 주로 세균이 갖고 있는 DNA를 자를 수 있는 효소(endonuclease)이다. 세균이 외부 DNA(virus)를 제거하기 위한 수단으로 만드는 것으로, 세균 자신의 DNA는 methyl화시켜 보호되므로 피해를 입지 않는다.

◉ Mechanism
① 효소내에 lysine residue(-NH)에 ATP가 결합함에 따라 AMP가 효소에 공유결합 형성
② Nicked DNA가닥의 5’phosphate에 AMP nucleotide가 전달

참고자료

· - 건국대학교 유전단백체 기능제어 연구센터
· - biochemistry.yonsei.ac.kr
· - Molecular Cloning, Joseph Sembrook