western blot (웨스턴블롯)

소개

생명과학관련 학과에서 자주 실험하는 western blot에 관해 작성한 자료입니다.
결과는 올리지 않았고 토의를 작성할 때 도움이 되는 내용에 집중하였습니다.

목차

(0)실험목적
1. 서론
2. 재료 및 방법
3. 토의

본문내용

1. 서론

western blot의 과정은 cell harvest-protein extraction-protein assay-SDSPAGE-transfer-blocking-Abs detection-detection으로 크게 나눌 수 있다.
cell harvest는 배양된 세포를 떼어내어 모으는 과정이다. 세포를 떼어내는 과정에는 물리적 방법과 화학적 방법이 있다. 물리적 방법은 scraper를 이용한 방법으로, 쉽고 빠르지만 물리적 영향이 세포간 신호전달에 영향을 줄 수 있다는 단점이 있다. 화학적 방법은 Trypsin EDTA(TE)를 이용하는 방법으로, 세포의 외부적 손상을 줄여줌으로써 세포의 성질이 비교적 유지되지만 반응시간을 기다려야하는 단점이 있다.
protein extraction은 cell에서 protein을 추출해내는 과정이다. 세포 안에서 세포소기관, 단백질, DNA, RNA등 생물학 분자를 추출해내는 방법에는 다양한 방법이 있다. homogenization(조직, 식물의 세포벽), sonication(조직), freeze/thaw(식물), reagent(동물세포).
protein assay(단백질 정량)에서는 protein의 농도를 측정한다. 각 sample내에 포함된 당백질의 양, 농도를 구하는 과정으로 SDS-PAGE에 loading되는 protein의 양이 동일해야 특정 단백질 양의 상대적인 값을 비교할 수 있다.
SDS-PAGE는 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis의 준말이다. SDS는 단백질을 1차 구조로 바꾸어주면서 주변에 (-)전하를 띠도록 한다. 단백질을 1차 구조로 바꾸어 주기 때문에 전하량은 오로지 단백질의 길이 즉, 분자량에 의해 분리할 수 있다. acrylamide의 농도가 높으면 gel 내부의 그물 구조가 더욱 촘촘해져 단백질 이동속도 차이를 더욱 높인다.

참고자료

· technote-western blot/정지은/서린바이오사이언스/2016
· 식품과학기술대사전/한국식품과학회/광일문화사/2008