western blot 웨스턴 블롯 레포트

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목차

1. 실험목적

2. 도 입
1) homogenization
2) Protein Assay
3) SDS PAGE
4) Transfer
5) western blot

3. 재 료

4. 실험방법
1) Sample preparation, WCL
2) Protein Assay
3) SDS-PAGE
4) Transfer
5) Western Blot
6) Stripping
7) Western Blot

5. 실험결과

6. 논 의

본문내용

실험목적
∙ Gsk3B antibody를 이용하여 Rat의 각 기관들(Stomach, Lung, Liver)에서 채취한 조직들의 Gsk3B를 Detection 할 수 있다.

도 입
● homogenization
불균질한 혼합물의 각 성분을 미세한 입자상 혹은 분자 상으로까지 분산시켜 전체를 균질하게 하는 것이다. 위 사진에서와 같이 Protein assay를 하기 전 채취한 sample(Detection of Cytoskeletal protein in Rat)을 잘게 으깨는 과정이다.

−Cell fractionation
세포의 target region을 끄집어내는 것을 의미한다.

−Whole Cell Lysate(WCL)
세포 전부를 녹인 용해액을 의미하는데 대게 nucleus를 제외한 것을 말한다.

● Protein Assay

단백질을 관찰하는데 필요한 최소한의 단백질의 양을 알아야하는데 이것은 단백질의 양(농도)를 구하는 방법이다.

−Absoulte value(절대값)
standard를 이용해 알 수 있다.
−Relative value(상대값)
Protein Assay에서 볼 때 어떠한 특정 단백질은 정해 이 단백질 과 측정하고자하는 단백질을 비교하여 값을 알 수 있다. 위 실험 에서는 Bovine Serum Albumin(BSA) 라는 단백질을 기준으로 삼는다.

−spectrophotometer
Bovine Serum Albumin과 측정하려는 protein sample을 넣고 농도를 측정해 비교한다. BSA는 595nm를 쏘면 갈색이 반사된다.

● SDS PAGE
SDS PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis ): 분자량에 따라 단백질을 밴드로 분리해 시료 속에 들어있는 단백질의 수, 양, 크기를 측정하는 방법이다.

참고 자료

Santa cruz
https://www.scbt.com/scbt/product/gsk-3beta-antibody-h-76?requestFrom=search
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