[분자생물학실험] Purification of Recombinant Proteins_Proteins separation by SDS-PAGE

목차

1. Summary
2. Keyword
3. Introduction
4. Materials & Methods
5. Reference

본문내용

Summary
우리는 Recombinant protein을 과발현 시킨 bacterial cell lysates를 이용하여 affinity chromatography를 사용 해 원하는 protein X를 얻어 내 그것을 SDS-PAGE를 통해 확인 할 수 있었다. Recombinant protein을 과발현 시킨 bacterial cell을 깨 원심 분리 후 상등액을 취해 sepharose bead에 흘려 보내주어 GST와 glutathione이 상호작용 하게 끔 유도하였다. 그리하여 protein이 bead에 붙게 되면 그 후 Elution작업을 거쳐 GST와 Protein X를 분리시켜 SDS-PAGE를 이용해 Protein X를 얻어 낼 수 있었다. 그리고 그 과정 동안 각 과정에 어떤 영향을 미치는지 확인 하기 위해 Flow-through부터 washing 1회 그리고 Elution 1회부터 6회까지 마지막으로 bead까지 모아 모두 함께 SDS-PAGE를 실행하였다. 그 결과 bead에서는 여러 band와 약 25kDa 영역에서 굵은 band를 확인 할 수 있었고, washing 1회에서는 옅은 band를 마지막으로 Elution 1회부터 6회에서는 약 25kDa 부근에서 진한 Band 1개를 각각 발견 할 수 있었다.

Keyword
Affinity chromatography / GST / SDS-PAGE

Introduction
크로마토그래피(chromatography)란 다공성 흡착제 입자를 일정한 길이만큼 충전시킨 판(column)에 용질이 들어 있는 혼합물을 통과시켜 흡착제 입자에 대한 용질의 흡착 특성 차이에 근거하여 분리하는 방법이다. 즉, 시간이 지나면서 흡착제에 잘 흡착되지 않는 용질은 관의 멀리까지 이동하고 쉽게 흡착되는 용질은 이동하는 속도가 느리다.
크로마토그래피 공정은 이동상(mobile phase)과 고정상(stationary phase)으로 이루어진다. 고정상은 흡착제, 이온교환수지, 다공성 물질, 또는 겔 등이며, 이들은 원통형관(cylindrical column)에 충진되어 있다.

참고 자료

http://www.cheric.org/ippage/e/ipdata/2008/03/file/e200803-1201.pdf
http://kbp.donga.ac.kr/xanta%EB%85%B8%ED%8A%B8/2011/2011-2/bioinst/11-2-bioinst-9-chromatography.htm
http://www.komabiotech.co.kr/www/board/board_viewing.phtml?no=339&page=78&type=tboard_board1
http://www.genehunters.co.kr/Training/03_1.htm
레닌저 생화학 (하) 제5판 / David L. Nelson, Michael M. Cox (역자: 백형환, 윤경식, 김호식) / 월드 사이언스 / 2010.05.20 / p1118~p1121