[분자생물학실험] purification and electrophoresis

목차

1. Summary
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results and Discussion
5. Reference

본문내용

Summary
Plasmid DNA란 염색체 밖에 존재하는 extrachromosomal small circular DNA이다. Plasmid DNA는 그 자체내에 replication origin을 가지고 있어서 박테리아 내에서 염색체 dNA 복제와 상관 없이 독자적으로 복제되는 특징이 있다. Plasmid DNA를 추출하기 위해서는 보통 miniprep이라고 부르며, 가장 보편적으로 Alkali lysis를 사용한다. 이 원리는 간단하게 cell wall과 cell membrane을 분리하고 DNA를 분리하여 추출하는 것이다. 이 실험 시에 사용되는 solution은 solutionⅠ, solutionⅡ, solutionⅢ로 나눌 수 있다. 또한 우리가 실험을 위해 spectrophotometric analysis를 이용하게 된다. Spectophotometry는 특정 파장의 빛을 액체에 통과시키면 빛의 강도가 감소하는 것을 이용하는 것이다. 분리 및 정제된 Plasmid DNA를 농도와 순도를 측정하기 위해 우리는 마지막에 Agarose gel electrophoresis를 사용하게 된다. DNA조각 혼합물을 미세한 여러 구멍을 지닌 Agarose나 polyacrylamide gel 판의 한 쪽 끝에 올려놓는다. 그 다음 gel 판 양쪽에 전압을 걸면 DNA는 인으로 인해 음전하를 띠기 때문에 DNA 조각들이 양극을 향해 이동하게 되는 원리를 이용한 것이다. 몇 시간에 걸쳐 DNA 조각들은 그 크기에 따라 이 gel 판에서 분리되어 각각 동일한 길이의 DNA 조각으로 된 사다리 형태의 밴드가 나타나게 된다. 이 방법들을 통해 우리는 Plasmid DNA의 추출 및 정제, 분리를 할 수 있게 된다.

Keyword : Plasmid DNA/ Spectophtometry/ Alkali lysis/ Agarose gel electrophoresis

Introduction
Plasmid DNA의 추출과 Plasmid DNA의 농도 및 순도를 측정해보는 실험에 있어서 우리가 알아야 할 기본 개념이 있다.

참고자료

· 레닌저 생화학 (상) 5edition / David L.Nelson, Michael M.Cox(백형환, 윤경식, 김호식)/ 월드사이언스/ p88,89 p292,293
· 필수세포생물학(essential cell biology)/역자: 박상대/Garland Science/p324,325,326
· 분자생물학 4edition/ George M. malacinski(역자: 심웅섭 외7명)/ 월드사이언스/ p313,314
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_20.php
· http://www.genehunters.co.kr/Training/01_3_3.htm