[일반생물학실험] cDNA 합성 및 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석

소개

cDNA 합성 및 Real-time PCR을 통한 유전자 발현 분석에 대한 실험레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. 세포들은 기본적으로 주위 환경에 적응하기 위해 필요한 유전자의 발현을 증가시키고, 필요 없는 유전자의 발현은 억제시키는 방법으로 유전자 발현을 조절한다.
1.2. 동일한 세포를 서로 다른 영양 환경의 배지에서 배양한 후 유전자 발현을 비교하기 위해 cDNA를 합성하고, Real-time PCR을 통해 유전자 발현의 차이를 직접 확인해 보고자 한다.

2. 실험 이론 및 원리
2.1. 실험 배경
cDNA는 mRNA를 역전사 시켜 만든 DNA 염기서열로, exon만 존재하는 성숙 mRNA에 상보적인 DNA이다. cDNA를 통해 발현된 DNA 염기서열이 무엇인지 파악할 수 있다. Real-time PCR은 PCR 과정이 진행됨과 동시에 증폭되는 DNA 표적서열의 양을 측정하는 실험방법이다. PCR은 중합효소연쇄반응으로, DNA의 표적서열을 선택적으로 증폭시키는 기술이다. PCR에는 증폭시키고자 하는 특정 염기서열에 맞는 두 종류의 프라이머와 dNTP, Taq DNA 중합효소 등이 필요하며, DNA denaturation(95℃), annealing(60℃), DNA extension(72℃)의 단계를 거쳐 DNA의 표적서열을 증폭시키게 된다. 한편, Real-time PCR은 PCR이 진행됨과 동시에 DNA 표적서열의 양이 측정되는 기술로서, 측정된 DNA 표적서열의 양은 컴퓨터에 자동으로 기록되어 확인할 수 있다. 참고로 증폭된 DNA 표적서열의 양은 SYBR Green이라는 형광물질을 통해 측정되는데, 이 SYBR Green 형광물질은 이중가닥 사이에만 끼어들게 되어 증폭이 완료된 DNA 표적서열의 양만 측정할 수 있게 한다.
5′-AGCTTAAGCCTGGTA-3′
3′-TCGAATTCGGACCAT-5′

그림 . DNA template와 primer 정리
그림 . 1st cycle
product가 나올 때까지 PCR 과정 쓰기. (단, primer는 3bp이고 첫 cycle엔 단계별로 온도, 설명)

참고자료

· Gerrit J. Viljoen, Louis H. Nel, John R.Crowther, 『Molec㎕ar Diagnostic PCR Handbook』, Springer, 2005