[A+레포트] 단백질 분리 (SDS-PAGE), 단백질 전사(western blot법)

목차

1. 주제

2. 재료 및 기구

3. 실험 목적 및 원리

4. 실험 방법
1) 시약 제조
2) SDS – PAGE
3) Western Blot

5. 실험결과

6. 이론
1) 전기영동 (electrophoresis)
2) 지지체
3) SDS-PAGE
4) Protein marker
5) Western blot
6) 시약, 용액 용어 정리

7. 고찰

8. 참고문헌

본문내용

SDS-PAGE는 단백질의 순도 검정이나, 단백질 분리, 단백질 분자량 측정 등을 위해 실행하는 기법이다. 분석하고자 하는 단백질 시료에 SDS나 β-mercaptoethanol 등을 가하면 강력히 변성되는 동시에 (–) charge로 하전 된다. 일정하게 하전 된 단백질 시료는 polyacylamide을 지지체로 하여 전기장을 이용하면 분자량에 따라 gel의 분자 걸름 효과와 전하의 효과에 의해 gel상에 분리된다. 작은 분자량 일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker와 비교함으로써 분자량의 추정이 가능해진다. SDS-PAGE는 분리능이 우수하여 western blot 또는 2차원 전기이동(2D)에 이용할 수 있다.

<중 략>

Western blotting은 SDS-PAGE를 행한 후, 단백질을 membrane에 전사하는 기법으로, 목적하는 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인하기 위해 항체를 이용해 특정 단백질을 검출하는 방법이다.SDS-PAGE에 의해 gel상에 크기 별로 분리된 단백질을 membrane (nitrocellulose paper)으로 전기이동 시킨 후 항원-항체 반응을 이용하여 특정 단백질에 비특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질을 검출한다.

<중 략>

①Membrane paper를 약 20초간 transfer buffer에 담가둔다.②Transfer kit 위에 스펀지를 올리고 위와 같은 순서대로 장치한다.(gel과 N.C paper가 잘 밀착되도록 하고, 중간에 기포가 들어가지 않도록 한다.)(gel이 – 극에, N.C paper가 + 극에 향하도록 카세트를 위치한다.)③Tank에 아이스팩을 넣고 transfer buffer를 채운다.④1시간 동안 100V에서 transfer를 시킨다.⑤Transfer가 끝나면 ponceau 용액에 2분정도 담구어 두어 염색한다.⑥단백질이 잘 transfer 되었는지 band 를 확인한 후 standard size marker에 위치를 증류수로 3-5분 가량 washing한다.

참고자료

· 김승호 저, 단백질 실험노트 상 추출, 분리 및 재조합 단백질의 발현, 월드 사이언스, 2006.
· 이양자 저, 영양 생화학 실험, 신광출판사, 2004.
· 김현숙 저, 최신 영양생화학 실험, 교문사, 2005.