Western Blotting Development

목차

1. Object
2. Result
3. Discussion
4. Reference

본문내용

[실험 결과에 관한 고찰]
신선한 membrane을 사용하여 다시 실험 해 본 결과 아주 깔끔한 결과물을 얻을 수 있었다. 예상 했던 것과 같이 FL의 길이가 가장 길고 580, 410 순으로 protein 길이를 확인 할 수 있었다. 이 전의 실험들에서 protein의 농도가 두 조에서 다르게 측정이 되었지만, 마지막 결과에서는 비슷한 양상을 보였다. pcDNA는 vector로 negative control 이며, FL은 약 110kD에서 우리가 원하는 밴드가 나타났고, 580은 90kD 쯤, 401은60kD 쯤에서 밴드가 나타났다

<중 략>

발광하는 것은 크게 형광(flurescence)과 인광(phosphorescence)으로 나뉜다. 형광등을 보면 켰을 때 밝은 빛을 낸다. 왜냐면, 전자가 형광물질을 때려서 형광물질이 에너지를 흡수해 excited state로 올라가면, 흡수된 에너지는 그림에 보시는 것처럼 에너지를 내놓는다. 즉 밝은 빛을 낸다. 이러한 총체적인 원리를 형광이라고 한다. 그림을 보면, 바닥상태의 전자가 S0에서 S1으로 올라가는데 전자가 에너지를 흡수하는 과정을 나타내고 S1에서 S0으로 다시 떨어지는 것을 형광이라고 표현한다. 굉장히 빠르므로 순간 나타났다 사라지는 정도의 에너지를 나타나게 한다. 전자상태의 변화가 바뀌지 않고 즉 singlet 에서 singlet으로 같기 때문에 빠르게 일어났다가 빠르게 사라진다,

<중 략>

3) specific, non-specific은 어떻게 구별되어 지는가?
원래 western blot(immuno blot) 자체가 면역학의 항원과 항체 사이에 일어나는 특이적인 반응을 이용한 실험으로 아주 specific하게 protein을 검출해 내는 방법이다. 즉, 우리가 원하는 protein에 Myc 등을 tagging함으로서 이를 antigen으로 여기는 antibody를 부착함으로서 구별해내게 된다. 즉 non-specific한 것에는 아예 antibody가 붙지 않는 것이 이론적으로는 설명이 되지만, 실제 실험에서는 우리가 원하지 않는, non-specific한 band가 여럿 뜨는 것을 볼 수 있다.

참고자료

· http://cafe.daum.net/bioexampass/5H6F/22?docid=1Ec2d5H6F2220080813153033
· Biochemistry, freedom, Jeremi외 2인, 65, 103p.
· 분자생물학, 아카데미서적, 김병흥 저, 315~317p.
· 단백질실험노트(하), 월드사이언스, 김승호,장규태(2001), 24~29, 122.