대장균 형질전환

소개

위의 자료는 카이스트 생물학실험 보고서입니다.

목차

Ⅰ. Objective
Ⅱ. Introduction
Ⅲ. Material
Ⅳ. Method
Ⅴ. Result
Ⅵ. Discussion

본문내용

Ⅰ. Objective
- 플라스미드 eGFP를 대장균에 넣어 형질전환을 시켜보자.
Ⅱ. Introduction
(1) 형질전환
형질전환이란 외부 DNA를 숙주세포 내에 넣어주어 세포가 원래의 성질과는 다른 새로운 유전형질을 추가로 얻게 되는 것을 말한다.
E.coli의 형질전환은 초기에는 발견이 되지 않았으나 박테리아를 찬 CaCl2로 처리한 다음 잠시 열처리를 하면 박테리오파지가 세포로 들어가 파지를 형성한다는 사실에 의해 처음 관찰되었다. 이와 같은 처리는 박테리아가 DNA를 흡수할 수 있는 수용능상태(competence)로 일시적으로 유도하는 것으로 박테리오파지뿐 아니라 plasmid DNA 등 여러 종류의 DNA에 의해 형질전환이 될 수 있다.

<중 략>

(1) retrovirus : dividing cell에서만 된다.(따라서 neuron cell등에서는 못씀.)
(2) lentivirus : non-dividing cell에서도 쓸 수 있다. 하지만 integration이 되는 문제는 아직 해결이 안됨
(3) adenovirus : non-dividing cell에서도 되고 host genome에 integration도 안되므로 gene delivery에 적합하게 사용할 수 있다.
Ⅲ. Material
- Spreader
- LB-amp 고체 배지
- Micro pippet
- ice
- competent cell ( BL21)
- Heating block
- eGFP를 포함한 Plasmid
Ⅳ. Method
- Competent cell은 BL21로 한다.
- DNA 2μl를 competent cell에 넣어 ice에 30분 동안 둔다.
- 42℃에서 30초간 heat shock 주고 ice에 2분 동안 둔다.
- LB-amp 배지 plate에 접종하여 spreading을 하고 배양기에 배양한다.

참고자료

· 없음