SDS-PAGE

소개

SDS-PAGE

목차

1.실험목적
2.실험원리
- 전기영동
- SDS-PAGE 원리
- Disc(불연속시스템)
- 염색기법
- BUFFER
3. 시약및 기구
4. 실험 방법

본문내용

1.실험 목적
SDS-PAGE를 이용한 단백질 전기영동으로 단백질을 분리하고, 미지 분자량을 측정해본다.

2. 실험 이론
전기영동 (electrophoresis)
- 단백질(protein)이나 핵산(amino acid) 등의 고분자물질은 하전(charge)을 띰.
- 이를 기초로 하여 이들 분자를 전기장을 띤 매질(gel)에서 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법.

전기영동의목적

① 원하는 단백질의 유무 확인
② 단백질의 분리 정도 확인(순수도)
③ 분자량을 이미 알고 있는 단백질을 비교하여 분자량 산출

전기영동 BUFFER선택
1.TAE(Tris-acetate EDTA)
- DNA agarose 전기 영동 시 주로 사용, 분자량 큰 경우 사용
2. TBE(Tris-borate EDTA)
- DNA 분자량이 작은 경우, 염기서열 분석 시 사용

<중 략>

15) loading 하기 직전에 sample과 size marker를
-20℃에서 꺼내와 heating(90~95℃, 10min)을 한다.
- sample을 loading하기 전에 가열하는 이유 : 꼬여있는 구조인 단백질을 완전히 선형으로 풀어내기 위함. 또한 단백질이 꼬여 있는 형태로는 SDS가 안쪽까지 침투하기 어려우므로 단백질에 열을 가해 변성시켜서 SDS가 안쪽까지 침투하여 단백질과 결합하도록 하려는 목적이 있다.

16) sample loading
① loading 하기 전에 각 well에 loading 할 sample을 유리판에 표시
② size marker : sample 20ul in 2x SDS-sample buffer
③ 남은 well에 각각 sample loading 양 만큼 sample buffer를 loading 해준다. (band broading을 막음)
17) gel running → blue dye 가 gel 바닥에 올때가지.
18) running이 끝나면 kit를 해체한 후 유리판 하나를 떼어낸다.

참고자료

· 없음