BCA method 단백질 정량 레포트

최초 등록일
2012.06.19
최종 저작일
2012.06
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목차

1. 주제
2. 재료 및
3. 실험 목적
4. 실험 방법
5. 이론 및 원리
5. 결과 및 고찰
8 참고문헌

본문내용

1. 주제
BCA method를 이용한 단백질 정량
2. 재료 및
기구
시약
BCA reagent A (sodium carbonate, sodium bicarbonate, bicinchoninic acid(BCA), sodium tartrate in 0.1M sodium hydroxide ),
BCA reagent B (4% cupric sulfate),
BSA (Bovine serum Albumin, 2mg/ml)
Sample: Mouse stomach cell (9개)
기구
50ml Conical tube, vortex, pipetteaid, pipette, e.p tube, rag, ice box, incubator, spectrophotometer, cell (큐벳)
3. 실험 목적
및 원리
단백질 정량의 여러 방법 중 BCA(Bicinchoninate)가 Cu+와 복합체를 형성해 자색으로 발색하는 원리를 이용한 BCA법으로 단백질을 비색 정량 하는 방법을 이해하고, 실제로 mouse의 stomach cell의 단백질을 정량 한다.
/
4. 실험 방법
BCA ( Bicinchoninic acid) 분석법
sample : mouse stomach cell
control : 1-1, 1-2, 1-3
curcumin treatment (25ul/kg) ? 저농도군 : 2-1, 2-2
curcumin treatment (50ul/kg) ? 고농도군 : 3-1, 3-2, 3-3, 3-4
BSA (vovine serum albumin) : 2mg/ml
Standard 6개, Sample 9개를 고려해 e.p tube에 라벨링을 한다.
BCA solution (A) 와 BCA solution (B)를 50mL conical tube에 50:1의 비율로 total volume이 20ml가 되도록 섞어 준 후 vortexing 한다.
(total vol 20ml = BCA (A) 19.6ml + BCA (B) 0.4ml)
BSA 용액(표준물질, 2mg/ml)을 각 농도에 맞게 pipette으로 취해 e.p tube에 넣어준다.

참고 자료

김승호 외, 단백질 실험노트, 사이언스, 2006.
노봉수 외, 식품 분석학, 수학사, 2011.

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