PCR 실험 방법 레포트

소개

RT-PCR (reverse transcriptase-PCR) 실험방법 레포트

목차

목차

1.RT-PCR.

2. 실험방법

3.원리

4. 용도

5. 시약 및 primer

6.참고 자료

본문내용

1.RT-PCR.
: 역전사 PCR. mRNA에 대해 PCR을 적용하기 위한 방법. PCR에서Taq DNA중합효소는 RNA에는 작용하지 않으므로 RNA사슬의 PCR을 하려면 먼저 cDNA를 제작해야 한다. 즉, 역전사효소와 올리고(dT)시발체를 사용하여 역전사반응을 전단계로서 시행한다. rT-PCR은 유전자발현, 즉 mRNA가 발현하고 있는 지를 검색할 뿐 아니라 mRNA의 정량도 가능하다. 정량한 mRNA의 cDNA를 매개체에 이입시킨 후, T7 RNA중합효소를 사용하여 RNA화해서 농도정량의 기준으로 사용하면 높은 감도로 신속, 정확하게 정량할 수 있다.

2. 실험방법
: RT-PCR은 mRNA 분리, cDNA합성(reverse transcription), PCR 증폭(amplification)의 세 가지 과정으로 진행된다. 이 중 mRNA로부터 reverse transcriptase를 이용하여 cDNA를 제조하는 방법에는 어떤 종류의 oligonucleotide를 primer로 사용하는가에 따라 세 가지 방법으로 나눌 수 있다.
첫째, gene specific primer(3`-말단쪽 유전자에 특이성을 지는 primer)를 이용하여 원하는 특정 부위의 cDNA만을 제조할 수 있다.
둘째, random한 6개 염기로 이루어져 있는 random hexmer를 이용해 mRNA,rRNA 등 전체 RNA에 상보적인 cDNA를 제조할 수 있다.
셋째, oligo-dT primer를 이용해 poly(A) signal을 가지는 전체 mRNA에 대하여 상보적 cDNA 제조하는 방법이 있다. Antisense primer를사용하는 방법은 다음과 같다.

참고자료

· 황혜진, Essentials of 유전학 5판, 월드사이언스