[기초유전학실험]6.DNA의 제한효소 처리 및 전기영동

소개글

실험서입니다.

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Material & Method

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

5. Discussion

먼저 insert는 제한효소 처리를 해주어도 10bp안의 작은 크기에서 절단되므로 전기영동 band가 제한효소 처리 전과 후가 거의 비슷하다.(실험에서는 insert는 전기영동하지 않았다.)
Vector의 경우는 제한효소 처리전의 uncut에서 Nicked, Linear, Supercoiled, Circular single stranded 4개의 다양한 band(형태)가 나타났는데, 제한효소 처리 후에는 Linear형태의 한 가지 band만 나타났다. 이는 제한효소를 처리하여 plasmid가 절단되면 기존에 어느 형태였던 간에 결과적으로 하나의 형태인 linear 의 형태가 된다. 따라서 한 개의 밴드가 형성된 것이다. 그리고 vector의 경우, 전기영동 사진은 uncut사진과 cut사진의 비교가 필수적이다. 이는 uncut plasmid DNA가 Nicked , Linear, Covalently Bonded, Supercoiled, Circular single stranded 등 다양한 형태로 존재 할 수 있다. 하지만 uncut plasmid에서 Linear의 형태로만 존재할 수도 있기 때문에 제한효소 처리 후에도 절단되지 않았지만 전기영동 사진에서는 Linear의 형태로 나올 수 있기 때문이다.

실험에 대한 기타 보충설명
① 제한효소를 사용할 때 하나만 사용하면 잘라진 부위가 다시 붙을 가능성이 높다. 따라서 되도록 두 종류의 제한효소를 사용한다.
② 제한효소 사용 시, 서로 다른 제한효소가 각각 다른 buffer에서 활성을 갖는다면 제한효소 2개가 공통으로 갖는 buffer를 사용하도록 한다. (공통 buffer는 제한효소를 만든 산업체에서 나온 매뉴얼의 표를 참조하도록 한다.)

참고 자료

유전학의 이해 . Robert H.Tamarin 저. 전상학 외 역. 라이프사이언스 2003
분자생물학(2판). Robert F.Weaver 저. 박상대 역. 라이프사이언스 2003
최신 유전학. D. Peter Snustad, Michael J. Simmons 저. 김상구 역. 범한서적 2002
http://www.bioneer.co.kr/