[발생학 실험] [서울대] Female mouse MII oocyte 회수

소개

[서울대학교]
발생학 수업시간에 작성한 레포트로서, 암컷쥐에서 난소를 회수하여 in vitro상태에서 배양해서 MII 상태까지 키우는 것이다.

자세한 실험목적은 아래와 같다.
Female mouse의 경우 난소 및 생식기관이 등 쪽에 붙어있다. 쥐의 등 쪽 척추 옆에 있는 난소를 적출한 후, 주변 지방조직과 물리적으로 제거한 후, 난소를 분리해 내서 그 안에 있는 여포를 분리시킨다. 분리시킨 여포를 모아서 seeding을 통해 follicle culture를 하고 9일째 되는 날 maturation을 시켜서 실험 10일째 되는 날 MII oocyte를 확인하는 것이 이번 실험의 목적이다.

실험에 사용한 각종 배지와, mouse type, 시약과 호르몬 등에 대해 자세히 기입했고,
실험은 총 2주에 걸쳐서 진행되었다. (2주일 내내 가서 실험)


실험방법으로 우선 난소를 적출하여, follicle을 culture하고,
일주일간 배지를 교환하면서 키우고,
마지막에 얼마나 컸는지 상태를 확인하는 것이었다.

실험과 더불어 Folliculogenesis에 대해서도 자세히 조사해서 기입했으며,
이를 활용하는 방안에 대해서도 정리해놨다.

또한 앞으로의 연구동향을 살펴보기위해 최근 논문 4가지를 조사하여 정리했다.

목차

1. 실험목적
2. 실험방법
3. 실험 결과 및 고찰
4. 실험관련 이론(Folliculogenesis)
5. 연구동향
6. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
발생-생식학 실험에 있어서 쥐는 매우 유용한 실험동물이다. 수명이 2년으로 짧고 번식력이 뛰어나며 크기가 작아 보관이 쉽기 때문이다. 또한 인간과 같은 척추동물이고 생물학적으로 인간과 매우 흡사하기 때문에 다른 분야의 생물학 실험에서 가장 많이 사용되는 실험동물이다. 실험용 쥐는 2가지로 나뉘는데 몸이 작은 mouse와 큰 rat으로 나뉘다. 우리 실험에서는 B6D2F1 female mouse를 사용하였다.
발생-생식학 연구를 위해서는 수정에 필요한 정자와 난자가 필요하다. 이를 위해 이번 실험에서는 Female mouse의 난소에서 난자를 둘러쌓고 있는 follicles을 체취한다. 우리가 실험에 쓴 mouse의 경우 B6D2F1종이며, 쥐를 안락사 방법으로는 물리적 방법으로 빠르고, 고통 없이 인도적으로 실시할 수 있는 경추 탈골방법을 사용하였다.
Female mouse의 경우 난소 및 생식기관이 등 쪽에 붙어있다. 쥐의 등 쪽 척추 옆에 있는 난소를 적출한 후, 주변 지방조직과 물리적으로 제거한 후, 난소를 분리해 내서 그 안에 있는 여포를 분리시킨다. 분리시킨 여포를 모아서 seeding을 통해 follicle culture를 하고 9일째 되는 날 maturation을 시켜서 실험 10일째 되는 날 MII oocyte를 확인하는 것이 이번 실험의 목적이다.


2. 실험방법
Materials >
- B6D2F1 female mouse(2week), L15 media, M2 media(체외조작배지), ①~④번 배지(아래 기입), Aspiration, capillary tube, 1ml syringe x 2, 핀셋, 수술용 가위, 70% ethyl alcohol, 60mm culture dish, IVF dish 등

①번 배지 : total 50ml 만든다.
α-MEM 47ml
FBS 2.5ml
ITS 500㎕
②번 배지 : 실험 시작일, 1일, 3일, 5일, 7일째에 넣어준 배지. Total 10mL만든다.
①번 배지 9.995ml
FSH 5㎕

참고자료

· ① 발생생물학, 조완규 저, 아카데미 서적, 2001
· ② Bric 실험 (http://bric.postech.ac.kr/labinfo)
· ③ MRC(Medical research council) (http://www.har.mrc.ac.uk)
· ④ 대한 바이오링크 (http://dhbiolink.com)
· ⑤ 서린바이오 사이언스 (http://www.seoulin.co.kr)
· ⑥ 위키피디아, Folliculogenesis
· ⑦ ITS 제품 정보 (http://www.geneisland.com/documents/mediatech/ITS.pdf)
· ⑧ 대일사이언스 (http://www.daeilscience.co.kr/)
· ⑨ 셈타코 바이오 코리아 (http://www.samtako.com)