유전자 발현 분석

소개

초 록 : fusarium을 FDM medium(fusarium defined medium)배지와 NMS medium(Nash and syder medium)배지에서 키운 뒤 각각의 배지에서 유전자 발현을 액틴과 비교해보았다. 맨처음 RNA isolation과정을 통해 RNA를 추출해내고 cDNA를 합성하는 과정으로 발현에 영향을 줄 수 있는 엑손과 인트론이 제거된 RNA로부터 DNA를 얻어내었다. 그다음 pRT-PCR을 통해 실시간으로 얼만큼 발현이 되는지 측정할 수 있었다. 그 결과 우리 1조는 액틴을 1로 두었을 때 FDM medium에서 키운 fusarium 유전자는 0.06 NMS medium에서 키운 fusarium 유전자는 0.84의 발현을 보였다.

목차

초록
서론
실험 원리 및 이론
-RNA Isolation
-미생물 배양
- cDNA synthesis
-qRT-PCR
재료 및 방법
-total RNA Isolation
-cDNA synthesis (Reverse transcription)
-qRT-PCR
결과
-total RNA Isolation
-qRT-PCR
고찰
참고문헌
참고
- fusarium의 생장 조건
- Genome DNA 혼입과 그 대책

본문내용

서 론
cDNA를 template로 하여, target gene(cyclic peptide synthase(CPS))에 대한 specific한 primer와 conserve하게 발현되는 internal tandard(ACTIN)에 대한 primer를 이용하여 qRT-PCR을 진행한다.
Internal standard의 발현량과 비교해서 target gene의 transcript level을 분석한다.
여기서 Internal standard란 그 양을 알고 있는 compound이다. 여기에서는 그 발현량이 일정하고, 잘 알려진 conserve된 유전자를 의미한다. qRT-PCR에 의해 target 유전자의 발현량을 정량분석하는 경우, 일정량의 발현량을 가진 internal standard와 비교∙분석을 통해 얻어진 값을 이용하여 target 유전자의 발현량을 얻어낼 수 있다. 대표적으로 Actin, Tubuli과 같은 유전자들이 쓰인다.

참고자료

· 참고 문헌
· http://blog.naver.com/jell2000?Redirect=Log&logNo=90073634103
· http://dwb4.unl.edu/Chem/CHEM869N/CHEM869NLinks/www.dur.ac.uk/~dbl0www/Staff/Croy/cDNAfigs.htm
· http://www.takara.co.kr
· 이양림, 1992, 발생과 유전자 발현, 민음사, p327~332
· 한국과학재단, 1990, 유전자 발현 기작, 한국과학재단, p.238~239