Plant genomic DNA isolation protein purification

소개

DNA 분리과정과 유전물질로서의 DNA의 중요성에 대해 알아보는 실험이었습니다.

1. CTAB buffer 조성 및 역할
2. PCI(CI)의 역할
3. isopropanol 이란?

● Ethanol로 washing?
● RNase
● 증류수 D.W [distilled water]
● 원심분리기 [centrifuge]

위의 7가지에 대한 discussion이 있답니다.
많지는 않지만 실험 중간에 찍은 사진도 함께 넣었습니다.

목차

없음

본문내용

Purpose
실험을 통하여 DNA 분리과정과 유전물질로서의 DNA의 중요성에 대해 알아본다.
Material
실험복, 실험용 장갑, 튜브, 튜브꽂이, 피펫, plant(N.ben,SSnn), CATB buffer, PCI, CI, isopropanol, RNase, 70% EtOH, D.W, homogenizer, 원심분리기, incubator, vaccum dry
Method
[1] 골무를 착용한 뒤 leaf disc 2장을 따서 1.5ml tube에 담는다
[2] labeling 후 얼음에 넣어둔다
[3] CTAB buffer 200μl를 넣고 homogenizer로 갈아준다.
(CTAB buffer는 pre-heating 65℃)
[4] 65℃ incubator에서 15분간 둔다.
[5] CI 200μl를 넣고 inverting한다. [위아래로 섞어줌]
[6] centrifuge, 12000rpm, RT, 5min [원심분리기]
[7] 상층액을 new tube에 옮긴다.
이때 중간층은 따로 분리하여 acetone에 넣어 보관 한다.
[8] CTAB buffer 30μl를 넣은 후 inverting한다. [위아래로 섞어줌]
[9] 65℃ incubator에서 15분간 둔다.
[10] CI를 상층액과 동량 넣어준다.
[11] centrifuge, 12000rpm, RT, 5min [원심분리기]
[12] 상층액을 따서 new tube에 옮긴 후 RNase 1μl 넣은 뒤
37℃ incubator에 20분간 반응시킨다.
[13] 동량의 PCI를 넣는다.
[14] centrifuge, 12000rpm, RT, 5min [원심분리기]
[15] 상층액 + isopropanol 500μl
[16] centrifuge, 12000rpm, 4℃, 20min [원심분리기]
[17] 상층액 버리고 70% EtOH로 washing 한다.
[18] centrifuge, 12000rpm, 3min, 4℃ [원심분리기]
[19] vaccum dry 7min
[20] D.W 30μl 넣고 tapping
[21] 1% agarose gel에 100V 25min loading 한다.
Result
내가 추출한 DNA는 사진 상의 13,14번째이다. DNA농도가 낮아 밴드가 뚜렷이 보이지 않는다

참고자료

· ●식물생물학 [박원학, 형설출판사] - P.193~198
· ●http://bric.postech.ac.kr - 국가지정 생물학 연구정보센터
· ●네이버 지식인 - 식물과 대장균의 genomic DNA분리, 추출의 차이점
· ●네이버 지식인 - extraction buffer 만드는법 좀 알려주세요...
· ●네이버 지식인 - DNA Extraction(phenol extraction)에서 쓰이는 시약 의 기능은?
· ●네이버 지식인 - EtOH ppt 및 PCI/CI extraction 하는 이유좀 알려주세 요~(내공多)
· ●네이버 지식인 - dna 추출하는 거에서 pci용액과 ci용액의 역할좀 자세 히 알려주세요
· ●네이버 지식인 - DNA를침전시킬때 isopropanol또는 100%ethanol을사 용하는데 그둘의 차이점
· ●네이버 지식인 - 시약을 잘 몰라서그럽니다...ㅜㅜ
· ●네이버 지식인 - plasmid isolation 에서 궁금한게 있어요..
· ●네이버 지식인 - CTAB 구조식 조사?
· ●네이버 지식인 - pasmid DNA추출 이요 ㅎ
· ●다음 - 백과사전