SDS PAGE에 의한 단백질의 분리, 단백질 전기영동 실험 방법.

소개

SDS PAGE에 의한 단백질의 분리, 단백질 전기영동 실험 방법에 관한 레폿입니다.
전기영동실험 전에 읽어 보시면 도움이 되실 겁니다.
제가 영어로 된 것을 번역학 것인데 도움이 되었으면 좋겠습니다.

목차

SDS PAGE에 의한 단백질의 분리

절차
화학 요소들과 요소의 역할
1. Stacking gel(겔)
2. Resolving gel(separating gel, running gel)
3. 화학적 요소들
● Tris
● Glycine
● Acrylamide
●Bisacrylamide
● Sodium Dodecyl Sulfate
● Ammonium persulfate
● TEMED
4. 과정과 가시화에 대한 화학약품들
● Bromophenol Blue
● Glycerol
● Coomassie Brilliant Blue
● 아세트산
● Butanol
● 2-Mercaptoethanol

환원하는 SDS-PAGE

Electrophoresis(전기이동) 과 staining

완충 시스템(Buffer systems)

본문내용

절차

분석되는 단백질 용액은 두 번째 그리고 비 이황화 물과 연결된 세 번째 구조들을 변성시키고 무게에 비례하여 각 단백질에 음성 Charge를 주는 음이온 세척제 SDS와 처음으로 혼합된다. 다른 단백질 들은 접는 형태들에 있어서 차이가 몇 단백질들을 다른 것들보다 Gel 기지를 통해서 더 잘 맞게 하기 때문에, 접는 차이 때문에 비슷한 분자량을 갖고 있는 단백질들끼리 다르게 움직일 것이다. SDS는 단백질들이 분자량(첫 번째 구조 또는 아미노산의 수나 사이즈)에 의해 분리될 수 있도록, 단백질들을 직선화하기 때문에, 이러한 문제들을 해결한다. 거의 단백질 1.0 g 대 SDS 1.4g 거의 일정한 무게(결합비가 단백질 g당 1.1~1.2 g 비로 변할 수 있지만)비로 SDS는 단백질과 결합한다. :대부분의 단백질에 대한 무게 비이기 때문에 Gel을 통한 이동 거리는 단백질의 크기만 직접적으로 관련이 있는 것으로 추정될 수 있다.
전기 이동 진행기간 동안에 gel을 통하여 단백질 용액의 진행상황을 실험자가 추적하기 위해 단백질 용액에 추적 물감이 첨가 될 수 있다.

화학 요소들과 요소의 역할

폴리아크릴 아마이드 Gel(PAG)은 1954년 초 조직을 자르는데 잠재적인 기초 매체로 알려졌다. 두 개의 독립적인 그룹 Davis와 Raymond는 1959년에 전기 연동 법에 이 PAG를 사용하였다. PAG는 PAG를 다재다능한 매체로 만드는 몇 개의 전기 이동 적으로 바람직한 특징을 갖고 있다. 폴리아마이드 겔은 사이즈와 차지에 따라서 단백질 분자를 분리한다. PAG는 평균 기공사이즈의 넓은 범위로 준비될 수 있고 높은 전압 편차들을 견딜 수 있고 여러 얼룩을 만들거나 제거하는 절차가 가능하고 분리된 부분들을 추출하여 소화시킬 수 있고 방사선 촬영과 영구 기록을 할 수 있는 합성 겔이고 열에 안정하고 투명하고 강하고 비교적 화학적으로 불활성이다. DISC 전기이동은 다른 기공 사이즈의 겔을 사용한다. DISC이름은 전기영동 기지에서 불연속성과 동시다발적으로 이온의(Anbalagan, 1999) 분리된 영역의 불일치 형태에서 일어난다. 겔이 2 층이 있는데, 하나는 Stacking 또는 Spacer 겔이고 다른 하나는 Resolving(분해) 또는 Separating(분리) 겔이다.

참고자료

· 없음