Gene cloning 실험 (오류의 원인)

소개

유전공학 실험의 한 학기를 마무리하면서 조교님께서 내주신 Report입니다.

모든 유전 공학적 실험의 오류를 개괄적으로 다뤘다고 할 수 있는 Report입니다.
실험 방법에서 S1이나 S2 buffer의 과다로 인한 오류, CIP처리로 인해 생길 수 있는 오류, 제한효소가 다른 부위를 cutting함으로써 생길 수 있는 오류 등등
다양한 오류의 원인이 서술되어 있습니다.

참고하시어 좋은 결과 있으시길 바랍니다.

목차

Gene Cloning
- 결과 Report -


■ 오류의 원인

≪ 세부 내용 ≫

▶ CIP 처리의 오류
▶ Moral ration의 오류
▶ Plasmid prep.에서 S2 용액 과량 첨가 오류
▶ 전사 or 해독의 문제
▶ Restriction systems
▶ 균주에 따른 형질전환율의 차이

■ 참고 문헌

본문내용

■ 오류의 원인

: 재조합 DNA 분자를 구성하는 과정에서 그 최종 산물에 어떤 다른 DNA 분자가 존재하지 않을 정도로 순수하기는 힘든 일이다. Ligation 혼합물은 원하는 재조합 분자뿐만 아니라 다음과 같은 분자들을 소수 포함할 수 있다.

1. Ligation 되지 않은 vector 분자
2. Ligation 되지 않은 DNA 단편
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ligation 되지 않은 분자는 박테리아 세포로 도입되어도 아주 예외적인 상황에서만 복제되기 때문에 거의 문제가 되지 않는다. 숙주효소가 이러한 DNA 단편을 절단하기 때문이다. 반면에, self-ligation 된 벡터 분자와 잘못된 재조합 플라스미드는 원하는 분자만큼 효과적으로 복제될 것이다. 그렇지만, 하나의 세포가 하나 이상의 DNA 분자를 취하는 것은 거의 일어나지 않는 일이기 때문에 원하는 분자의 정제는 클로닝을 통해서 이루어질 수 있다.

각 세포는 단 하나의 DNA 분자를 취하고 하나의 세포에서 유래된 콜로니를 생성하기 때문에 결과적으로 클론은 동일한 DNA 분자만을 포함하는 세포로 이루어져 있다.
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참고자료

· 한국유전학회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004, pp. 169-186.
· ... 나머지 참고문헌은 다운 받으시면 보실 수 있습니다.