DNA의 제한효소 처리 및 전기영동

소개

DNA의 제한효소 처리 및 전기영동

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion

본문내용

1. Abstract
- 이번 실험은 Plasmid vector에 삽입할 Insert DNA와 Plasmid vector의 DNA를 제한효 소 처리를 해서 자르는 것이 목적 이다. 그리고 자른 Insert DNA와 Plasmid vector의 DNA를 전기영동 사진으로 확인해 본다.
실험 방법은 먼저 각 조가 뽑은 plasmid DNA에 D.W., 10× buffer, 10X BSA, NdeⅠ, NheⅠ를 총 50㎕가 되게 만들어 준다. 그리고 37℃에서 한 시간 동안 제한효소 처리한 후에 CIP, 10X CIP buffer, D.W.를 넣은 후에, 37℃에서 한 시간 동안 제한효소 처리한다.
다음으로 각 조가 뽑은 Insert에 D.W., 10× buffer, 10X BSA, NdeⅠ, NheⅠ를 총 50㎕가 되게 한다. 그리고 37℃에서 1~3시간 DNA가 충분히 절단되도록 한다.
제한효소 처리를 한 Plasmid vector의 DNA와 Insert DNA를 전기영동 사진에서 확인 해본 결과 Plasmid는 6Kb정도의 크기로 Linear 형태이고 uncut과는 형태와 크기에서 차이가 났다. uncut은 Circular single stranded, Supercoiled, Nicked의 형태로 관찰 되 었다. Insert는 0.5Kb의 크기로 볼 수 있었고 형태는 Linear 였다.
결과적으로 제한효소를 처리해서 Insert DNA와 Plasmid vector의 DNA가 잘렸다는 것 을 확인 할 수 있었고 이 실험으로 우리는 Plasmid vector의 DNA와 Insert DNA를 붙 여줄 수 있는 상태를 만들었다.

2. Introduction
- Gene coloning의 후반부 단계인 제한효소 처리 단계이다. Plasmid vector에 삽입할 Insert DNA와 Plasmid vector의 DNA를 자르는 것이 목적이다.
1. 제한효소(Restriction enzyme, endonuclease)
DNA는 특정부위를 자르거나 붙일 수가 있다. 이때 DNA를 자른다는 것은 nucleotide 들이 연결되어 있는 phosphodiester bond를 끊어내는 것을 의미한다. 이러한 역할을 하는 효소를 nuclease라 한다. endonuclease의 대표적인 것인 restriction enzyme이다.
2. 제한효소의 기능
DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재 하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포내로 침입해 들어오는 virus와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA 절단부위 염기를 메틸화시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보 호하고 있다.

참고자료

· ① 유전학의 이해 / Robert H.Tamarin / 전상학 외 / 라이프사이언스 / 20030702
· ②http://www.komabiotech.co.kr/www/board/board_viewing.phtml?no=434&page=67&type=tboard_board1