[A+] 2024 서강대 현대생물학실험2 1차 (competent cell 제조)

소개

"[A+] 2024 서강대 현대생물학실험2 1차 (competent cell 제조)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

이번 실험에서는 실험에 사용할 LB 배지와 시약을 제조하고 competent cell을 만들었다. DIW, NaCl, tryptone, yeast extract를 섞어 LB broth를 제조하고 agar와 ampicillin, kanamycin을 첨가하여 colony 선별을 위한 LB plate를 제작하였다. 만든 media와 plate는 autoclave를 통해 멸균하였다. 대장균 strain 중 하나인 DH5α를 LB 용액에서 배양하고 600nm에서의 흡광도 측정값이 0.4-0.6인 것을 통해 대장균이 exponential phase임을 확인하였다. 인위적으로 competent 상태를 유도하기 위해 CaCl2를 처리하고 42℃에서 heat shock을 주었다. Ca2+에 의해 세포막의 유동성을 감소되며 heat shock은 세포막의 투과성을 높여주는 효과가 있다. Transformation을 위해 만든 competent cell 100µl에 plasmid DNA (5ng/µl) 2µl를 넣었으며 사용한 plasmid DNA는 pUC19 plasmid DNA로 β-lactamase를 암호화하여 ampicillin 저항성을 가진다. Ampicillin agar plate에 O/N 배양한 후 다음날 관찰된 colony는 32개로 형질전환 효율을 계산한 결과는 32 x 103 CFU/µg 이다. 형질전환 외에도 PCR을 통해 원하는 유전자를 증폭하였다. Template DNA, primer, 2X PCR master mix, forward primer, reverse primer를 섞어 Taq DNA polymerase 효소를 사용하여 PCR하고 primer를 통해 제한효소의 인식부위를 포함하는 PCR 산물을 얻었다. Forward와 reverse 두 종류의 primer를 사용하면 원하는 서열만을 정확하게 증폭할 수 있다.

참고자료

· Neil A. Campbell (2019), Biology A Global Approach. 12th, Pearson, pp. 317~319
· Geoffrey M. Cooper (2019), The Cell A Molecular Approach, 8th, Oxford University Press, pp. 124~126
· David L. Nelson (2021), Lehninger Principles of Biochemistry, 8th, W.H. Freeman and Company, pp. 274~280