생화학 실험 레포트 - EtBr-CsCl density gradient 원리를 이용한 plasmid DNA 분리

소개

생화학실험 당시 작성했던 레포트 입니다~
해당 강의 A+ 받았고,
실험 고찰 자세히 적었어요

목차

Ⅰ. Introduction
1. Experimental purpose
2. Experimental Theory
1) Plasmid
2) Plasmid preparation, Alkaline Lysis
3) Sol Ⅰ, Sol Ⅱ, Sol Ⅲ
4) Maxi-prep
5) EtBr-CsCl density gradient
6) Ultracentrifuge

Ⅱ. Experimental materials and Methods

Ⅲ. Results

Ⅳ. Discussion

본문내용

- Experimental purpose
많은 양의 pure한 DNA를 얻는 방법인 Maxi-prep에 대해 이해하고, 실제 실험을 통해 plasmid DNA를 얻는다.

- Experimental Theory
1. Plasmid
Plasmid는 세균 세포의 염색체와는 별도로 스스로 복제할 수 있는 DNA 분자이다. Plasmid는 1 Kb에서 1 M에 이르는 다양한 크기로 존재하며, 모양에 따라 그 종류를 나눌 수 있다. 첫번째로 Open-circular plasmid는 DNA가 원형으로 존재하는 형태로 한 가닥에 틈(Nick)이 존재한다. Relaxed circular는 틈없이 완전한 원형의 형태로 존재하는 것이다. 선형으로 존재하는 것은 linear DNA라고 한다. 마지막으로 supercoiled(closed-circular) 형태를 가지는 DNA 종류가 있는데, 이는 DNA 가닥이 꼬여 가장 뭉친 상태로 존재하는 것을 의미한다. 우리는 이번 시간에 pure한 supercoiled 형태의 DNA를 얻고자 하였다.

2. Plasmid preparation, Alkaline Lysis
Plasmid preparation는 plasmid DNA를 위한 DNA 추출 및 정제 방법이다. Plasmid의 정제는 세균의 세포벽의 파괴하여 세균이 가진 plasmid DNA를 얻거나 또는 transformation 시킨 plasmid DNA를 대장균 속에 넣고 배양한 후 세포를 파괴하여 plasmid를 추출하는 방법이다.
박테리아 세포로 부터 plasmid DNA를 분리하는 방법은 다양하지만 가장 보편적인 방법으로는 Alkaline Lysis 방법이 사용된다. 이 방법은 plasmid를 분리하는 방법으로, 가장 보편적으로 이용되는 방법이다. 세포벽과 막을 파괴하여 DNA만을 분리하는 것을 목적으로 하며, Plasmid DNA와 Genomic DNA(Chromosome DNA)를 분리할 수 있다.

참고자료

· 부성희 외. 생화학실험. 서울: 청문각
· Molecular Biology of the Gene. Watson저. (7판). Cold Spring Haber Laboratory
· Plasmid. 미생물학백과. 한국미생물학회. http://www.msk.or.kr
· EtBr-CsCl density gradient centrifugation. 2019년 11월 27일 검색. https://pocafiamma.tistory.com/1622