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플라스미드 DNA 분리 및 정제 실험2025.12.121. 플라스미드 DNA (Plasmid DNA) 플라스미드 DNA는 염색체 밖에 존재하는 원형의 DNA로, 박테리아 내에서 게놈 DNA와 별개로 복제되는 특징이 있다. 유전공학 실험에서 재조합 DNA 조작을 위한 벡터 DNA로 사용되며, 원하는 DNA 단편을 삽입하여 다양한 유전자 클로닝과 단백질 발현 등에 널리 활용된다. 본 실험에서는 대장균(E.coli DH5α)으로부터 플라스미드 DNA를 분리하고 정제하는 과정을 수행했다. 2. 알칼리 용해법 (Alkaline Lysis) 플라스미드 DNA를 분리하는 가장 보편적인 방법으로, ...2025.12.12
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플라스미드 DNA의 분리 및 정제 방법2025.01.041. 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA는 세균 세포에서 분리할 수 있으며, 일반적인 total cell DNA 분리 방법과 유사하다. 세포를 배양하여 수확하고 세포 추출물을 만든 후, 단백질을 제거하고 에탄올 침전으로 DNA를 농축할 수 있다. 그러나 플라스미드 DNA 분리에는 세균 염색체 DNA와의 분리가 중요한 차이점이다. 플라스미드는 세균 염색체에 비해 크기가 작고 구조적 차이가 있어 이를 이용하여 분리할 수 있다. 2. 플라스미드 미니프레프 방법 플라스미드 DNA를 소량으로 분리하는 대표적인 방법으로는 알칼리 용해법,...2025.01.04
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유전공학 기술 (DNA 분리 및 정제, PCR, 재조합 DNA)2025.04.301. 유전공학 유전공학은 DNA의 인위적인 변형을 통해 유전물질을 변화시키는 기술로, 의약품 분야, 환경, 농축산 분야 등에 활용되고 있다. 주요 기술로는 DNA 분리 및 정제, 재조합 DNA, PCR(중합 효소 연쇄반응) 등이 있다. 2. DNA 분리 및 정제 플라스미드 DNA는 유전공학적 실험에서 vector DNA로 사용되며, 알칼리 용해법을 통해 분리할 수 있다. 이 방법은 세포막을 파괴하고 DNA를 변성시켜 플라스미드 DNA를 추출한다. 3. 재조합 DNA 재조합 DNA 기술은 연구하고자 하는 유전자를 세균의 플라스미드에 ...2025.04.30
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EtBr-CsCl 밀도 구배를 이용한 플라스미드 DNA 분리2025.12.131. 플라스미드(Plasmid) 플라스미드는 세균 세포의 염색체와 별도로 스스로 복제할 수 있는 DNA 분자이다. 1 Kb에서 1 Mb의 다양한 크기로 존재하며, 형태에 따라 open-circular, relaxed circular, linear, supercoiled(closed-circular) 등으로 분류된다. 이 실험에서는 가장 뭉친 상태인 supercoiled 형태의 순수한 플라스미드 DNA를 분리하는 것을 목표로 한다. 2. 알칼리 용해법(Alkaline Lysis) 박테리아 세포로부터 플라스미드 DNA를 분리하는 가장 ...2025.12.13
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플라스미드 DNA 정제 실험 예비레포트2025.11.171. 플라스미드 DNA 정제 박테리아 세포로부터 플라스미드 DNA를 정제하는 것은 유전자 재조합 실험의 기본 과정이다. 플라스미드 DNA는 세균의 유전체 DNA에 비해 매우 작고, 유전체 DNA는 선형이 되는 반면 플라스미드 DNA는 원형의 CCC(공유결합 닫힌 원형) 구조를 가진다는 차이점을 이용하여 정제한다. 1979년 번보임과 돌리 등이 개발한 알칼리 세포용해법이 현재 널리 사용되고 있다. 2. 알칼리 세포용해법 알칼리 세포용해법은 3단계로 구분된다. 첫째, 대장균 세포를 완충액에서 안정화시킨다. 둘째, 알칼리와 SDS 용액을...2025.11.17
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초원심분리를 이용한 플라스미드 DNA 추출 및 정제2025.12.131. 플라스미드(Plasmid) 플라스미드는 세균 세포의 염색체와 별도로 스스로 복제할 수 있는 DNA 분자이다. 다양한 크기로 존재하며, 형태에 따라 open-circular, relaxed circular, linear, supercoiled(closed-circular) 형태로 분류된다. Open-circular는 원형이지만 한 가닥에 틈이 있고, supercoiled는 DNA 가닥이 꼬여 가장 뭉친 상태이다. 박테리아 세포 내에 존재하는 intact한 플라스미드 DNA 구조는 supercoiled 형태이며, 이는 전기영동에서...2025.12.13
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식물 조직에서 RNA와 genomic DNA 분리 및 전기영동 분석2025.12.131. 핵산 추출 및 정제 식물 조직에서 total RNA와 genomic DNA를 분리하기 위해 액체질소로 세포벽을 파쇄한 후 TRIzol 시약(phenol과 guanidine isothiocyanate 포함)을 사용하여 RNA를 추출한다. Guanidine isothiocyanate는 RNase를 불활성화시키고, phenol은 DNA를 파괴한다. Chloroform을 추가하여 층을 분리하고, isopropanol로 DNA와 RNA를 침전시킨다. Genomic DNA 추출 시 CTAB buffer를 사용하여 polysaccharid...2025.12.13
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세포의 DNA 정제 및 전기영동 분석2025.12.191. DNA의 구조와 특성 DNA는 두 개의 폴리뉴클레오티드 사슬로 구성된 중합체로 이중 나선 구조를 형성한다. 뉴클레오타이드는 질소 염기(A, T, G, C), 디옥시리보스 당, 인산기로 구성되며, 염기쌍 규칙(A-T, G-C)에 따라 수소 결합으로 결합된다. DNA는 인산기로 인해 음전하를 띠며, 진핵생물에서는 염색체 형태로 핵 내에 저장되고, 원핵생물에서는 세포질의 원형 염색체에 저장된다. DNA의 이중나선 구조에서 나선의 한 바퀴 수직길이는 3.4nm이고 뉴클레오타이드 10개가 나선 한 바퀴를 형성한다. 2. 전기영동의 원리...2025.12.19
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박테리아에서 DNA 분리2025.01.271. plasmid DNA 분리 실험 목적은 plasmid DNA 분리에 대해 이해하고, 그 과정 중 하나인 plasmid mini-preparation에 대해 알아보는 것이다. plasmid DNA 분리법의 공통적인 세 단계는 overnight culture, mini preparation, 순수한 plasmid DNA 분리 과정이다. mini-prep은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로, 알칼리 조건에서 세포를 파괴시켜 DNA만을 분리하는 것이다. 2. plasmid DNA 분리 시약 실험에 사용된 시약은 LB 배지...2025.01.27
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PCR 산물 정제 실험 예비 레포트2025.11.151. PCR 산물 정제 원리 작은 DNA 조각을 정제하는 원리를 이해하고 정제 방법을 숙지하는 것을 목적으로 한다. Column을 이용한 DNA 정제 방법을 사용하여 PCR product를 정제한다. 이 과정에서 Gel & PCR purification system kit을 활용하며, 제조사의 protocol을 따른다. 정제된 DNA는 Agarose Gel 전기영동으로 농도를 확인하고 4℃에서 보관한다. 2. Column을 이용한 DNA 정제 방법 Spin column을 이용한 DNA 정제 과정은 다음과 같다. 정제할 DNA를 포함...2025.11.15
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