이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)

소개

"이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)"에 대한 내용입니다.

목차

0. 실험목표
1. Introduction
2. Method
3. Discussion
4. 참고문헌

본문내용

0. 실험목표
항원에 대한 항체의 특이적 결합을 이용하여 단백질 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 분석하는 Western Blot의 원리를 이해하고, 단백질의 SDS - PAGE 분리, SDS - PAGE gel 로부터 membrane 으로의 단백질 transfer, 항원 - 항체반응 및 항체에 부탁된 효소의 반응에 의한 발색반응 등의 실험 원리 및 실험 기법을 습득한다.
이번 실험에서는 cell을 깨서 lysis를 해서 먼저 얻어낸 단백질 sample을아크릴 아마이드겔에다가 전기영동을 하면 전류에 따라서 분리된다. 그 젤에서 분리된 단백질을 멤브레인으로 옮기는 트랜스퍼 과정을 거친다. 그 다음에 그 멤브레인을 블라킹 하는 블라킹 솔루션을 부어서 블라킹을 해주고 그다음에 1차 안티바디와 2차 안티바디를 붙이고 디텍션을 한다. 이 과정에서 트랜스퍼가 성공적으로 이루어졌는지 폰슈 S 염색결과를 보며 분석하고 2차 항체와 1차 항체의 종의 동일 여부로 인한 디텍션 결과 및 단백질 양에 따른 밴드 분석을 통해 웨스턴 블랏의 전반을 이해하고 분석한다
1. Introduction
Western blot 은 항원 - 항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이러한 western blot 방법은 전기영동으로 분리한 단백질의 검출을 쉽게 하기 때문에 각종 분석에 이용되고 있다. Western blot 방법은 크게 3 단계로 나누어 진행되는데, 첫 번째로는 단백질 혼합물에 대하여 SDS - PAGE 를 수행하여 단백질들을 크기에 따라 분리하는 단계이다. 이 단계에서는 protein 이 고유한 3차 구조를 잃고 linear 상태가 되어 오직 분자량에 의해서만 단백질들이 분리된다. 두 번째 단계는 SDS - PAGE gel 상에 분리된 단백질들을 nitro - cellulose 등의 membrane에 transfer 하는 단계이다. 이 과정에서 단백질로부터 SDS 가 제거되어 단백질의 3차 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. 세 번째로, 대상 단백질을 항원 - 항체 반응을 통해 검출해나는 단계이다.

참고자료

· 생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태,Wikipedia - Western Blot, SDS – PAGE