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이화여대 생명과학실험 A+ 리포트(Western Blot)2025.01.231. Western Blot 원리 Western Blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이 실험에서는 단백질의 SDS-PAGE 분리, 단백질의 membrane으로의 transfer, 항원-항체 반응 및 항체에 부착된 효소의 반응에 의한 발색 반응 등의 실험 원리 및 기법을 습득한다. 2. SDS-PAGE와 Stacking/Resolving Gel의 차이 Stacking gel은 단백질 시료를 gel에 loading 했을 때 모든 시료가 동일한 시작점에서 출발할 수 있도록 하...2025.01.23
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생명과학실험1 Western Blot2025.01.171. Western Blot Western Blot은 gel 전기영동을 통해 단백질을 분리하고, 특정 단백질의 존재 여부를 확인하는 실험이다. 이 실험에서는 SDS-PAGE를 이용하여 단백질을 크기별로 분류하고, 분류된 단백질을 membrane으로 옮긴 후에 항원-항체 상보적 결합을 이용하여 단백질의 존재 여부를 시각화하여 결과를 확인한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 SDS라는 detergent를 사용하여 단백질의 구조를 선형으로 만듦으로써 단백질의 전하 밀도를 일정하게 만들고, 결국 단백질들이 크기로만 분류될 수 있게...2025.01.17
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대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13
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생화학실험 단백질의 정성분석2025.05.061. Western blot Western blot은 단백질을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동을 이용하여 분리하고, 니트로셀룰로오스 membrane에 옮긴 후 찾고자 하는 단백질의 항체(1차 항체)와 결합시킨 후 이 항체와 반응하는 2차 항체를 이용하여 밴드를 형상화하는 기술이다. 이 기술은 크기별 분리, 단백질을 고체 지지체로 이동, 1차 및 2차 항체를 사용하여 표적 단백질을 표시하여 시각화하는 3가지 요소를 사용한다. 2. SDS-PAGE SDS-PAGE는 질량에 의한 단백질 분리가 가능한 전기 영동법이다. 폴리아크릴아마이드...2025.05.06
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Protein electro-transfer and Western blot 실험보고서2025.01.161. Western blot Western blot은 찾고자 하는 protein의 antigen epitope와 반응하는 antibody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)을 찾아내는 방법이다. 전기 영동을 이용하여 단백질을 gel 상에서 크기에 따라 분리한 후, membrane에 transfer한다. Membrane에 발광하는 probe가 붙어 있는 antibody를 붙여주는 항원-항체 반응을 이용하여 찾고자 하는 특정 단백질을 검출한다. 2. Nitrocellulose membrane Nitrocell...2025.01.16
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SDS-PAGE & Western Blot 결과 레포트2025.05.111. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 크기에 따라 분리하는 기술로, 단백질을 SDS로 변성시켜 음전하를 띄게 한 뒤 전기영동을 통해 분리한다. Stacking gel과 Separating gel의 pH 차이를 이용해 단백질을 동일한 선상에 정렬시킨 후 크기에 따라 분리한다. 이를 통해 단백질의 분자량을 추정할 수 있다. 2. Western Blot Western Blot은 SDS-PAGE로 분리된 단백질을 membrane에 전이시킨 뒤, 특정 단백질을 항체를 이용해 검출하는 기술이다. 1차 항체와 2차 항체를 이용해 목적...2025.05.11
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Protein Electro-transfer and Western blot2025.01.231. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는 단백질의 존재를 확인하는 전반적인 과정을 의미한다. 2. SDS의 역할 및 원리 SDS-PAGE는 SDS가 단백질에 일정 간격으로 결합하여 charge density를 일정하게 ...2025.01.23
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Western Blotting 레포트2025.01.211. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하여 band를 형상화하는 과정입니다. 이 방법에는 Sample preparation, Electrophoresis를 위한 Gel preparation, Transfer, Antib...2025.01.21
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[생화학실험] Western blot Analysis 완충용액 제조와 시약 제조 시 유의사항2025.01.291. Western Blot Analysis Western Blot은 전기영동을 통해 분리된 단백질 중 항원-항체 반응을 이용하여 특정 단백질의 존재를 확인하는 방법입니다. 실험 과정 중 과도한 pH 변화를 안정화시키기 위해 완충용액(Buffer)를 사용하는데, Western Blot Analysis에 필요한 완충용액은 Tris-Buffered Saline, Tris-Glycine, Transfer Buffer 등이 있습니다. 2. Tris-Buffered Saline Tris-Buffered Saline은 용액의 pH를 조절하는 ...2025.01.29
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Clostridium perfringens와 Western blotting2025.05.131. Clostridium perfringens Clostridium perfringens는 식중독을 일으키는 균으로, 4개의 exotoxin을 만들어 내며 그 중 enterotoxin이 가장 중요하다. 이 enterotoxin은 열에 약해 60°C에서 10분이면 불활성화 되지만, 영양세포가 아닌 sporulation 과정에서 발현된다. 오염된 음식이나 변에서 발견될 수 있으며, 제대로 조리되지 않은 음식을 섭취할 경우 식중독이 발생한다. 2. Western blotting Western blotting은 단백질을 크기별로 분리하여...2025.05.13
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