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DPPH이용 흡광도 및 라디칼 소거능(천연물학 A+)

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한컴오피스
최초등록일 2023.12.13 최종저작일 2022.11
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DPPH이용 흡광도 및 라디칼 소거능(천연물학 A+)
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    목차

    1. 실험목적
    2. 실험방법
    3. 실험소재
    4. 측정값 및 결과 분석

    본문내용

    1. 실험 목적
    진행한 실험의 총 개수는 2개의 실험을 진행하였다. 이를 실험 A, 실험 B로 정의하겠다. 실험 A의 목적은 다양한 시료들의 각 시약들의 항산화능을 측정하기 위함이다. 이때 실험 환경 및 시간이 충분치 않아 직접적으로 체내의 라디칼을 측정하기는 어렵기 때문에 DPPH를 사용하여 대신 측정한다. 결국 실험 결과를 가지고 해당 시료가 항산화능이 좋다고 단정지을 순 없기 때문에 예측하는 정도에서 마치도록 한다.
    실험 B의 목적은 각 시료들의 그리스 시약과 반응하여 발생하는 NO(활성산소)의 양을 측정하기 위함이다. 실험 B 위 언급했던 것과 동일한 사유로 체내 혹은 배지에서 실험을 진행할 수 없기 때문에 정확한 값 분석이 아닌 기대해볼만한 시료를 찾는 정도에서 마치도록 한다.

    2. 실험방법
    실험 A
    1. DPPH를 에탄올로 희석하여 0.0004M인 DPPH 용액을 만든다. 이때 라디칼은 빛과 같은 외부환경에 민감하므로 반응전까지는 호일에 싸 보관한다.
    2. 항산화물질로 추정되는 소재들을 증류수에 희석시켜 각각 0.1mg/ml, 0.01mg/mL로 만든다. 농도 차에 따른 소재들의 반응 비교를 위해 총 2개의 농도로 준비한다. 총 실험할 시료의 수는 증류수를 포함한 8개의 시료로 실험을 진행한다.
    3. 항산화 물질로 추정되는 시료와 DPPH용액을 1:1로 반응시킨다. 이때 각 용액들의 용량은 50mL로 설정한다.
    4. 3의 과정 후 호일에 싸서 실온에 30분간 방치한다.
    5. 분광광도계를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정한다.

    참고자료

    · https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=fishsun33&logNo=221386705342
    · https://prezi.com/v482xoroel8w/dpph/?frame=73d7cad981a9cdf0036356cb7d4d4b2e44ffca83
    · https://www.happycampus.com/report-doc/24625705/
    · https://m.blog.naver.com/PostView.naver?isHttpsRedirect=true&blogId=hi_may0&logNo=220776414805
    · https://m.post.naver.com/viewer/postView.nhn?volumeNo=10083022&memberNo=10728965
  • AI와 토픽 톺아보기

    • 1. DPPH 라디칼 소거능 측정
      DPPH 라디칼 소거능 측정은 천연물의 항산화 활성을 평가하는 가장 기본적이고 널리 사용되는 방법입니다. 이 방법은 간단한 절차, 빠른 측정 시간, 그리고 재현성 있는 결과를 제공하여 초기 스크리닝에 매우 유용합니다. 다만 DPPH는 지용성 라디칼이므로 수용성 항산화제의 활성을 과소평가할 수 있다는 한계가 있습니다. 따라서 다른 측정 방법과 병행하여 더욱 정확한 항산화 활성 평가가 필요합니다. 표준화된 프로토콜 준수와 적절한 양성 대조군 선택이 결과의 신뢰성을 높이는 데 중요합니다.
    • 2. NO 활성산소 측정 및 염증반응 평가
      NO(일산화질소)는 생체 내 중요한 신호전달 분자이면서 동시에 과도한 생성 시 염증을 유발하는 활성산소입니다. NO 측정을 통한 염증반응 평가는 천연물의 항염증 효능을 객관적으로 판단하는 데 매우 중요합니다. Griess 시약을 이용한 측정법이 일반적이며, 세포 모델을 활용한 평가가 생체 관련성을 높입니다. 다만 NO의 짧은 반감기와 측정의 기술적 어려움을 고려하여 신중한 실험 설계가 필요하며, 다양한 염증 마커와의 통합 평가가 더욱 신뢰할 수 있는 결과를 제공합니다.
    • 3. 천연물 소재의 항산화 활성 비교
      천연물 소재의 항산화 활성 비교는 기능성 식품 개발과 신약 개발의 기초 연구로서 매우 중요한 의미를 가집니다. 다양한 천연물 간의 항산화 활성을 객관적으로 비교하기 위해서는 여러 측정 방법을 병행하는 것이 필수적입니다. 각 방법의 원리와 한계를 이해하고 적절한 방법을 선택하여 종합적으로 평가해야 합니다. 또한 활성 성분의 동정, 용매 추출 조건, 농도 의존성 등을 고려한 체계적인 비교 연구가 필요하며, 이를 통해 우수한 천연물 소재를 효율적으로 발굴할 수 있습니다.
    • 4. 분광광도계를 이용한 흡광도 측정
      분광광도계를 이용한 흡광도 측정은 항산화 활성 평가의 핵심 기술로서 정량적이고 객관적인 데이터를 제공합니다. 이 방법은 비용 효율적이고 빠른 측정이 가능하며, 다양한 파장에서의 측정으로 여러 항산화 평가 방법을 동시에 수행할 수 있습니다. 정확한 측정을 위해서는 기기의 정기적인 보정, 적절한 큐벳 선택, 그리고 표준화된 프로토콜 준수가 중요합니다. 다만 탁도나 색상이 있는 시료의 경우 배경 흡광도 보정이 필요하며, 측정 결과의 신뢰성을 위해 반복 측정과 통계 분석이 필수적입니다.
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