2주차_pipetting, 50X TAE buffer preparation

목차

1. Purpose
2. Theory
3. Apparatus/reagent
4. Procedure
5. Data&Results
6. Discussion
7. Reference

본문내용

Purpose: pipette 사용법을 익힌다. 50X TAE buffer를 만들고, 그 용도를 안다.

Theory
1. Pipetting 사용법 및 주의사항
Pipette은 액체 시료를 옮길 때 사용하는 실험기구로, 일체형으로 구성된 유리 피펫부터 전자 피펫까지 그 종류가 매우 다양하다. 종류에 따라서 각기 다른 정확도와 정밀도를 가진다.
피펫은 부분적으로 진공을 만들고, 선택적으로 진공을 풀 때 액체가 끌려오는 현상을 이용한다. 그 중 micro pipette의 경우 1~1000 μL 범위에 해당하는 액체를 옮길 때 사용하며, 세부적으로 P10, P20, P200, P1000 등으로 구분할 수 있다. 마이크로 피펫의 종류에 따라 취할 수 있는 액체의 부피는 다음과 같다.

Pipette의 구조는 다음과 같다. 피펫의 가장 위쪽에 있는 버튼(plunger)은 액체를 흡입하거나 방출할 때 누른다. 이 버튼은 두 번의 멈춤 지점이 있다. 또한, volume adjustment knob로써 수평 방향으로 돌아가며, 한 번에 옮길 액체의 양을 조절할 때 사용한다. 피펫을 사용해서 용액을 옮길 때는 가장 먼저 원하는 부피를 옮길 수 있는 적절한 피펫을 골라야 한다. 그리고, 용량을 조절한 후 피펫에 맞는 멸균 피펫 팁을 꽂아야 한다. 일반적인 시료를 옮길 때 팁이 꽂힌 피펫을 1st stop(가장 먼저 멈추는 지점, 얕은 멈춤 지점)까지 누른다. 그리고 그 상태로 액체 시료에 팁을 넣고, 손가락을 떼면 plunger가 원상태로 돌아온다. 이 과정에서 피펫은 액체 시료를 원하는 부피만큼 취한다. 시료를 옮길 때는 plunger를 1st stop까지 눌러서 시료를 옮긴 후, 2nd stop까지 눌러서 피펫 팁에 액체가 남지 않도록 완전히 옮겨야 한다.

참고자료

· Daniel C Harris. 분석화학. 자유아카데미. 2021. 10판 pp263-290, pp.221~230, pp73-90