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[예방약학실험7] Hydrogen peroxide assay

"[예방약학실험7] Hydrogen peroxide assay"에 대한 내용입니다.
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최초등록일 2023.06.21 최종저작일 2023.05
예방약학 예방의학 독성학 Hydrogen peroxide
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[예방약학실험7] Hydrogen peroxide assay
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    목차

    1. Experimental purpose
    2. Material
    3. Method
    4. Result
    5. Discussion

    본문내용

    1. Experimental purpose: Hydrogen peroxide assay를 통해 세포 내 ROS의 양을 정량한다.
    2. Material: DCF-DA (10mM), PBS, DW, DMEM (culture media), PTP (cell lysis buffer), cell (nontreated, H₂O₂ treated, H₂O₂ and chemical treated), conical tube, 1.75ml tube, tube rack, microcentrifuge, vortex mixer, micropipette, pipet tip, trash bin, latex glove, marker pen, microplate reader, black 96 well plate
    3. Method
    Day 1, Cell seeding: 세포를 12 well plate에 seeding하고 37℃ 인큐베이터에서 5% CO₂ 조건으로 하룻밤동안 키운다.

    참고자료

    · 없음

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    • 1. Hydrogen peroxide assay
      The hydrogen peroxide (H2O2) assay is a widely used analytical technique for the detection and quantification of hydrogen peroxide, a reactive oxygen species (ROS) that plays a crucial role in various biological processes. This assay is particularly valuable in the field of oxidative stress research, as it allows researchers to measure the levels of H2O2 in biological samples, providing insights into the cellular redox status and potential oxidative damage. The hydrogen peroxide assay typically involves the use of a chromogenic or fluorogenic reagent that reacts with H2O2 to produce a measurable signal, such as a color change or fluorescence. Common reagents used in this assay include horseradish peroxidase (HRP) coupled with a substrate like Amplex Red or 2',7'-dichlorofluorescin diacetate (DCFDA). The intensity of the signal generated is proportional to the concentration of H2O2 in the sample, allowing for quantitative analysis. One of the key advantages of the hydrogen peroxide assay is its sensitivity and specificity. With proper sample preparation and assay optimization, researchers can detect H2O2 at low micromolar or even nanomolar concentrations, making it a valuable tool for studying oxidative stress in various biological systems, such as cell cultures, tissue samples, or even in vivo models. Additionally, the assay can be adapted to different experimental setups, including plate-based formats for high-throughput screening or more specialized techniques like flow cytometry or microscopy-based imaging. However, it is important to note that the hydrogen peroxide assay is not without its limitations. Factors such as sample matrix, the presence of interfering compounds, and the potential for cross-reactivity with other ROS can affect the accuracy and reliability of the results. Careful experimental design, appropriate controls, and thorough data analysis are crucial to ensure the validity of the findings. Overall, the hydrogen peroxide assay remains an essential tool in the field of oxidative stress research, providing researchers with a reliable and sensitive method to quantify H2O2 levels and gain insights into the complex interplay between oxidative stress and various biological processes.
    • 2. Dihydroethidium (DHE) assay
      The dihydroethidium (DHE) assay is a widely used technique for the detection and quantification of superoxide (O2•-), a reactive oxygen species (ROS) that plays a crucial role in various physiological and pathological processes. This assay is particularly valuable in the field of oxidative stress research, as it allows researchers to measure the levels of superoxide in biological samples, providing insights into the cellular redox status and potential oxidative damage. The DHE assay relies on the oxidation of the non-fluorescent dihydroethidium (also known as hydroethidine) to the fluorescent product ethidium, which intercalates with DNA and emits a red fluorescence. The intensity of the fluorescence signal is proportional to the concentration of superoxide in the sample, allowing for quantitative analysis. One of the key advantages of the DHE assay is its specificity for superoxide. Unlike some other ROS detection methods, the DHE assay is relatively selective for superoxide, making it a valuable tool for studying the role of this particular ROS in various biological processes. Additionally, the assay can be adapted to different experimental setups, including plate-based formats for high-throughput screening or more specialized techniques like flow cytometry or microscopy-based imaging. However, it is important to note that the DHE assay is not without its limitations. Factors such as sample matrix, the presence of interfering compounds, and the potential for non-specific oxidation of DHE can affect the accuracy and reliability of the results. Careful experimental design, appropriate controls, and thorough data analysis are crucial to ensure the validity of the findings. Furthermore, the DHE assay is not without its challenges in terms of interpretation. The conversion of DHE to ethidium can be influenced by various factors, including the presence of other ROS, enzymatic activities, and cellular redox status. Researchers must exercise caution when interpreting the results and consider the potential confounding factors that may influence the observed fluorescence signal. Despite these limitations, the DHE assay remains an essential tool in the field of oxidative stress research, providing researchers with a reliable and specific method to quantify superoxide levels and gain insights into the complex interplay between oxidative stress and various biological processes.

  • 자료후기

      Ai 리뷰
      이 문서는 세포 내 ROS 양을 정량하는 실험을 수행하고 결과를 분석한 보고서입니다. 실험 목적, 방법, 결과 및 토론이 체계적으로 정리되어 있어 실험의 전반적인 내용을 잘 이해할 수 있습니다.

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