총 8개
-
A+ 생화학실험 <12주차. Protein expression> 레포트2025.01.201. 발현 벡터 (pET vector) 발현 벡터(expression vector)는 분자 클로닝 결과로 얻은 재조합 DNA를 competent cell을 비롯한 다른 세포에 전달하는 데 사용한다. pET 벡터는 E. coli에서 재조합 단백질을 발현하기 위해 사용하는 대표적인 발현 벡터이다. pET 벡터는 플라스미드에 해당하나, 이 외에도 viral vector나 artificial chromosome 등이 발현 벡터로 사용될 수 있다. 발현 벡터의 역할을 하기 위해서는 세포 내에서 자가 복제가 가능해야 하며, 제한 효소에 의한 ...2025.01.20
-
Nester 미생물학 7장: 전사, 복제, 번역 및 유전자 발현2025.11.171. 전사(Transcription) 전사는 DNA의 단일가닥을 주형으로 RNA를 합성하는 과정으로, 개시, 연장, 종료 단계로 이루어진다. RNA 중합 효소가 프로모터에 결합하고 시그마 인자의 도움을 받아 개시되며, DNA의 5'에서 3' 방향으로 이동하면서 RNA를 합성한다. DNA의 염기 A, T, G, C는 RNA에서 U, A, G, C로 전사되며, 종료부위에서 Rho 단백질이나 NusA 단백질에 의해 전사가 종료된다. 2. DNA 복제(DNA Replication) DNA 복제는 시작, 연장, 종결 단계로 이루어진다. 복제...2025.11.17
-
유전자 발현에서의 오페론과 되먹임 억제2025.05.111. 음성 피드백 음성 피드백은 결과가 원인을 억제하여 결과를 적절하게 유지하는 조절 작용을 말한다. 이러한 음성 피드백은 우리 몸의 모든 항상성 조절 과정과, 대부분의 호르몬 조절 과정에 관여한다. 티록신의 분비 조절이 대표적인 예시이다. 2. 되먹임 억제 유전자 발현에서도 음성 피드백과 유사한 현상인 되먹임 억제가 일어난다. 되먹임 억제는 최종 산물이 앞선 효소 반응을 억제하는 반응을 말한다. 대장균의 트립토판 합성 과정에서 트립토판이 억제자 단백질과 결합하여 오페론의 작동을 멈추게 하는 것이 대표적인 예이다. 3. 오페론 기능...2025.05.11
-
SDS-PAGE2025.01.121. SDS-PAGE SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다. 2. Discontinuous Buffer System Discontinuous buffer system은 stackin...2025.01.12
-
식품생화학 RNA 및 단백질의 합성2025.05.071. RNA 합성 RNA 합성은 DNA에 저장된 유전정보를 이용하여 이루어지며, RNA 중합효소, DNA 주형, 전구체(NTP), 금속이온 보조인자가 필요합니다. RNA에는 리보솜 RNA(rRNA), 전령 RNA(mRNA), 전달 RNA(tRNA)가 있으며, RNA 합성은 개시, 연장, 종결의 과정을 거칩니다. 2. 전사의 조절 원핵생물의 유전자 발현은 오페론이라는 유전자 집단으로 조절되며, lac 오페론은 락토스 대사와 관련된 유전자들로 구성되어 있습니다. 락토스 유무에 따라 lac 오페론의 활성이 조절됩니다. 3. 진핵생물의 유...2025.05.07
-
재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli2025.01.121. GST-tagged Proteins glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 재조합 단백질의 N 말단에 결합하여 정제를 도와준다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 2. BCA assay BCA는 Lowry...2025.01.12
-
유전학2_경북대2025.05.031. DNA microarray DNA microarray는 고체 표면에 부착된 미세한 DNA 조각의 집합체입니다. DNA 칩과의 차이점은 DNA 칩은 합성된 올리고뉴클레오타이드로 배열되어 있고, DNA 마이크로어레이는 변성된 DNA가 배열되어 있습니다. DNA 마이크로어레이의 장점은 매우 희귀한 전사체도 검출할 수 있고 전사체 수준의 작은 차이도 감지할 수 있습니다. 단점은 프로브의 하이브리드화 효율이 다를 수 있고 사전 서열 지식이 필요하다는 것입니다. 2. RNA-seq RNA-seq은 각 전사체를 서열에 따라 식별할 수 있고...2025.05.03
-
대장균에서 재조합 단백질의 생산과 Western blot에 관한 실험2025.01.131. IPTG IPTG는 대장균 lactose operon의 효소합성을 유도하는 강력한 유도물질이다. 보통 유도물질은 operon의 활동에 의해 만들어지는 β-D-galactosidase에 의해 대사 이용하는 것이 많지만, IPTG는 분해되지 않아 비대사성 유도물질이라고도 불린다. 또한, 고농도로 사용시 galactoside permease가 없는 세포에도 투과할 수 있기 때문에 permease가 없는 균주에서의 유도실험에도 사용된다. 2. Buffer condition Tank buffer에는 glycine과 Cl-(Tris-ba...2025.01.13