박테리아 배지 제조 및 미생물 배양법과 저장법

문서 내 토픽

1. 배지 제조 및 멸균

R2A 배지를 고체배지와 액체배지로 제조하는 방법을 다룬다. 고체배지 300㎖는 R2A broth 0.945g과 agar powder 4.5g을 증류수에 혼합하고, 액체배지 50㎖는 R2A broth 0.1575g을 사용한다. 제조된 배지는 121℃에서 15분간 autoclave로 멸균하며, 플라스크는 뚜껑을 열어두고 bottle은 뚜껑을 살짝 열어 호일로 감싼 후 멸균한다. 배지 상단을 호일로 감싸고 종류, 날짜, 제조자, 용량 등을 labelling한다.
2. Spreading plate method

Serial dilution한 미생물 배양액을 평판배지에 접종하는 방법이다. Pipette으로 100㎕ 정도를 plate 중앙에 접종한 후, 일회용 spreader로 퍽퍽해질 때까지 골고루 도말한다. 배지는 뒤집어서 37℃ incubator에서 24시간 배양한다. 희석액은 pipetting으로 균일한 농도를 만들어 오차를 줄이고, plate 뚜껑 노출 시간을 최소화하여 공기 중 미생물 오염을 방지한다.
3. Streaking을 통한 순수분리

일회용 loop로 single colony를 따서 새로운 배지에 4분획 가로긋기로 streaking하는 기술이다. 첫 번째 구역부터 균주를 접종한 후 각 구역이 약간 겹치게 진행하면, 1분획에서 4분획으로 진행될수록 균의 농도가 희석되어 4분획에서 single colony로 순수분리된다. 사용한 loop는 알코올램프로 화염멸균하여 미생물을 사멸시킨다.
4. 고체배지와 액체배지의 특성

고체배지는 colony가 형성되어 순수분리에 적합하고 오염여부를 colony로 확인할 수 있다. 액체배지는 대량 배양에 적합하지만 colony가 형성되지 않아 순수분리가 불가능하고 오염 여부를 확인할 수 없다. 배양 시 배지를 뒤집어서 보관하는 이유는 37℃ incubator에서 뚜껑에 습기가 차서 맺힌 물방울이 배지에 떨어지는 것을 방지하기 위함이다.

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1. 배지 제조 및 멸균

배지 제조 및 멸균은 미생물 배양의 기초가 되는 매우 중요한 과정입니다. 적절한 영양소 조성의 배지를 준비하고 고온 고압 멸균이나 여과 멸균 등의 방법으로 오염 미생물을 제거하는 것은 순수한 미생물 배양을 위해 필수적입니다. 특히 멸균 과정에서 배지의 성분이 변성되지 않도록 적절한 온도와 시간을 설정하는 것이 중요하며, 멸균 후 배지의 무균성을 유지하기 위한 보관 관리도 매우 중요합니다. 이러한 기본적인 준비 과정이 잘 이루어져야만 신뢰할 수 있는 미생물 실험 결과를 얻을 수 있습니다.
2. Spreading plate method

Spreading plate method는 액체 배양액에 포함된 미생물을 고체 배지 표면에 균등하게 분산시켜 개별 콜로니를 형성하게 하는 효율적인 방법입니다. 이 방법은 미생물의 농도 측정, 순수 배양 획득, 그리고 미생물 수의 정량화에 매우 유용합니다. 유리 막대를 이용한 균등한 도말이 중요하며, 적절한 희석 배수를 선택하여 계산 가능한 수의 콜로니를 얻는 것이 핵심입니다. 다만 고점도 배양액이나 응집된 미생물의 경우 균등 분산이 어려울 수 있다는 제한점이 있습니다.
3. Streaking을 통한 순수분리

Streaking 방법은 백금이나 니크롬 루프를 이용하여 배지 표면에 미생물을 선 형태로 그으면서 순차적으로 희석하는 고전적이면서도 효과적인 순수 분리 기법입니다. 이 방법의 장점은 특별한 장비 없이 간단하게 수행할 수 있으며, 혼합된 미생물 집단에서 개별 미생물을 효과적으로 분리할 수 있다는 점입니다. 루프의 멸균, 적절한 스트리킹 패턴, 그리고 배지의 건조 정도가 성공의 중요한 요소입니다. 현재도 많은 미생물학 실험실에서 널리 사용되는 신뢰할 수 있는 방법입니다.
4. 고체배지와 액체배지의 특성

고체배지와 액체배지는 각각 고유한 특성과 용도를 가지고 있습니다. 고체배지는 한천을 포함하여 개별 콜로니 형성이 가능하므로 순수 배양 획득과 미생물 형태 관찰에 유리하며, 액체배지는 미생물의 빠른 증식과 대량 배양에 적합합니다. 고체배지는 혐기성 미생물 배양이 어렵지만 액체배지는 상대적으로 용이하며, 액체배지는 미생물 수 측정이 용이한 반면 고체배지는 정량화가 더 정확합니다. 실험의 목적과 미생물의 특성에 따라 적절한 배지를 선택하여 사용하는 것이 중요합니다.

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